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特異性皮炎（AtopicDermatitis,AD）是一種慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病，構(gòu)建可靠的小鼠或大鼠動(dòng)物模型對于研究其發(fā)病機(jī)制、評估治療方法至關(guān)重要。以下為你詳細(xì)介紹特異性皮炎小鼠和大鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵內(nèi)容，涵蓋模型構(gòu)建方法、評價(jià)指標(biāo)及注意事項(xiàng)等。

一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及品系

（一）小鼠

1.遺傳模型

NC/Nga小鼠：此品系源自日本，對AD具有遺傳易感性。其皮膚屏障功能存在缺陷，在普通環(huán)境中會(huì)自發(fā)出現(xiàn)類似AD的癥狀，例如皮膚紅斑、鱗屑、苔蘚樣變等，同時(shí)伴有血清IgE升高以及Th2細(xì)胞極化現(xiàn)象。該模型適合用于AD發(fā)病機(jī)制的研究以及長期藥效的評估，但需要在特定的無病原體（SPF）環(huán)境中飼養(yǎng)。

BALB/c小鼠：屬于常用的近交系小鼠，通常需要通過化學(xué)誘導(dǎo)或過敏原致敏的方式來構(gòu)建AD模型。

C57BL/6小鼠：可通過基因編輯（如敲除Filaggrin基因）來模擬人類AD的皮膚屏障缺陷。

2.誘導(dǎo)模型：一般采用化學(xué)試劑（如DNFB、TNBS）或過敏原（如OVA）對小鼠進(jìn)行處理，以誘導(dǎo)出AD樣炎癥。

（二）大鼠

SD大鼠或Wistar大鼠：體型相對較大，便于進(jìn)行皮膚操作和樣本采集，常通過化學(xué)誘導(dǎo)（如DNFB）來構(gòu)建AD模型，但自發(fā)性AD模型較為少見。

二、模型構(gòu)建方法

（一）化學(xué)誘導(dǎo)法（以DNFB為例）

1.適用動(dòng)物：BALB/c小鼠、SD大鼠。

2.操作步驟

致敏階段：將小鼠背部皮膚進(jìn)行脫毛處理（需注意避免損傷皮膚），然后涂抹2%DNFB的丙酮/橄欖油溶液（體積比為4:1），每次使用50100μL，連續(xù)處理2天。

激發(fā)階段：在致敏后的第7天，用1%DNFB溶液涂抹小鼠耳部或背部皮膚，每周23次，持續(xù)24周，以維持炎癥反應(yīng)。

3.特點(diǎn)：操作相對簡便，能夠快速誘導(dǎo)出紅斑、水腫等急性炎癥癥狀，但與人類AD的慢性病程存在一定差異，適合用于短期藥物篩選實(shí)驗(yàn)。

（二）過敏原致敏法（以O(shè)VA為例）

1.適用動(dòng)物：BALB/c小鼠。

2.操作步驟

致敏階段：通過腹腔注射含有OVA（20μg）和氫氧化鋁佐劑（2mg）的混懸液，每周1次，連續(xù)3周，使小鼠產(chǎn)生過敏反應(yīng)。

激發(fā)階段：將1%OVA溶液涂抹于小鼠背部脫毛處的皮膚，每天1次，連續(xù)710天，或者使用OVA霧化吸入的方式進(jìn)行激發(fā)。

3.特點(diǎn)：能夠模擬過敏原誘導(dǎo)的Th2型免疫反應(yīng)，血清IgE水平會(huì)顯著升高，適合用于研究AD的免疫機(jī)制。

（三）遺傳模型（NC/Nga小鼠）

1.操作要點(diǎn)：將NC/Nga小鼠飼養(yǎng)在SPF環(huán)境中，通常在68周齡時(shí)會(huì)自發(fā)出現(xiàn)AD樣癥狀，隨著周齡的增加，癥狀會(huì)逐漸加重，1216周齡時(shí)癥狀最為典型。

2.特點(diǎn)：無需進(jìn)行人為干預(yù)即可自發(fā)建模，病理表現(xiàn)與人類AD更為相似，適合用于研究AD的慢性病程和發(fā)病機(jī)制，但成本較高，且對飼養(yǎng)環(huán)境的要求較為嚴(yán)格。

（四）基因編輯模型（如Filaggrin敲除小鼠）

1.原理：Filaggrin基因的突變與人類AD的皮膚屏障缺陷密切相關(guān)，通過CRISPR/Cas9技術(shù)敲除小鼠的Filaggrin基因，可導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)表皮屏障功能異常，進(jìn)而誘發(fā)AD樣病變。

2.特點(diǎn)：能夠精準(zhǔn)模擬人類AD的遺傳病因，適合用于研究屏障功能缺陷在AD發(fā)病中的作用。

三、模型評價(jià)指標(biāo)

（一）臨床評分

可參考人類AD的SCORAD評分標(biāo)準(zhǔn)，對動(dòng)物皮膚的以下指標(biāo)進(jìn)行量化評估，各項(xiàng)指標(biāo)的評分總和即為臨床評分。

|指標(biāo)|評分標(biāo)準(zhǔn)（03分）|

|||

|紅斑/水腫|0=無；1=輕度；2=中度；3=重度|

|鱗屑|0=無；1=少量；2=中等量；3=大量|

|苔蘚樣變|0=無；1=輕度增厚；2=明顯增厚；3=皮革樣變|

|瘙癢行為|0=無；1=偶爾搔抓；2=頻繁搔抓；3=持續(xù)搔抓導(dǎo)致皮膚破損|

（二）組織病理學(xué)檢查

取材：取病變部位的皮膚組織，經(jīng)固定、包埋、切片后，進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。

觀察指標(biāo)：表皮是否出現(xiàn)增生（棘層肥厚）、角化不全，真皮層是否有炎癥細(xì)胞（如嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）浸潤，以及血管周圍是否有炎癥細(xì)胞聚集等情況。

（三）免疫指標(biāo)檢測

血清IgE水平：采用ELISA法檢測血清中總IgE和特異性IgE（如抗DNFBBSA抗體、抗OVA抗體）的水平。

細(xì)胞因子：通過ELISA或流式細(xì)胞術(shù)檢測皮膚組織或外周血中Th2型細(xì)胞因子（如IL4、IL13、IL31）、Th1型細(xì)胞因子（如IFNγ）以及趨化因子（如CCL17、CCL22）的表達(dá)水平。

（四）皮膚屏障功能檢測

經(jīng)表皮水分丟失（TEWL）：使用TEWL測定儀在小鼠背部皮膚未處理區(qū)域和病變區(qū)域進(jìn)行測量，TEWL值越高，表明皮膚屏障功能越差。

角質(zhì)層含水量：通過皮膚含水量測定儀或稱重法（如膠帶剝離法結(jié)合紅外光譜分析）來評估角質(zhì)層的含水量。

四、注意事項(xiàng)

（一）動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境

遺傳模型小鼠（如NC/Nga）對環(huán)境較為敏感，需要飼養(yǎng)在SPF環(huán)境中，嚴(yán)格控制溫度（22±2℃）、濕度（50%±10%）和光照周期（12h光照/12h黑暗），以減少環(huán)境因素對模型的干擾。

避免使用含漂白劑或刺激性的墊料和消毒劑，防止加重動(dòng)物的皮膚炎癥。

（二）試劑與操作細(xì)節(jié)

化學(xué)試劑（如DNFB）具有強(qiáng)刺激性，操作時(shí)需佩戴手套和口罩，在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免接觸皮膚和黏膜。

脫毛時(shí)可使用脫毛膏或電動(dòng)剃毛器，但要注意避免損傷皮膚，以免影響模型的穩(wěn)定性。

誘導(dǎo)或激發(fā)過程中，需定期觀察動(dòng)物的狀態(tài)，若出現(xiàn)嚴(yán)重的全身反應(yīng)（如食欲下降、體重減輕），應(yīng)及時(shí)調(diào)整處理方案。

（三）對照設(shè)置

空白對照組：使用溶劑（如丙酮/橄欖油）替代誘導(dǎo)劑，進(jìn)行相同的操作處理。

陽性對照組：使用已知有效的藥物（如地塞米松乳膏、他克莫司軟膏）進(jìn)行干預(yù)，以驗(yàn)證模型的有效性和藥物的作用。

（四）倫理與福利

遵循動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的3R原則（減少、替代、優(yōu)化），盡量減少動(dòng)物的使用數(shù)量，并通過鎮(zhèn)痛、麻醉等措施減輕動(dòng)物的痛苦。

定期對動(dòng)物進(jìn)行健康檢查，若動(dòng)物出現(xiàn)無法恢復(fù)的嚴(yán)重炎癥或感染，應(yīng)及時(shí)實(shí)施安樂死。

五、模型應(yīng)用與局限性

（一）應(yīng)用場景

發(fā)病機(jī)制研究：可用于探究AD中免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子、信號通路以及遺傳因素的作用。

藥物研發(fā)：用于評估外用藥物（如乳膏、凝膠）、口服藥物或生物制劑的療效和安全性。

屏障修復(fù)研究：可用于篩選促進(jìn)皮膚屏障修復(fù)的成分（如神經(jīng)酰胺、膽固醇）。

（二）局限性

小鼠和大鼠模型的免疫反應(yīng)與人存在一定差異，例如小鼠的Th2反應(yīng)更為強(qiáng)烈，而人類AD可能同時(shí)存在Th1/Th2/Th17等多種免疫失衡。

化學(xué)誘導(dǎo)模型多為急性炎癥，缺乏人類AD的慢性復(fù)發(fā)性特點(diǎn)，遺傳模型雖更接近人類AD，但飼養(yǎng)成本較高且建模周期較長。

六、前沿進(jìn)展

類器官模型：結(jié)合皮膚類器官（包含角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等）與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)，可更精準(zhǔn)地模擬人類AD的微環(huán)境。

人源化小鼠模型：將人類皮膚組織或免疫細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，構(gòu)建更接近人類病理的AD模型。

通過合理選擇模型構(gòu)建方法并嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，能夠?yàn)樘禺愋云ぱ椎难芯刻峁┛煽康膭?dòng)物模型，助力于AD發(fā)病機(jī)制的闡明和創(chuàng)新療法的開發(fā)。在開展實(shí)驗(yàn)前，建議參考最新的文獻(xiàn)（如《JournalofInvestigativeDermatology》中的相關(guān)模型研究）并結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化方案。