RIPA裂解液（強）
簡介：
多種成分均可以從細胞中提取總蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(強) (Enhanced RIPA Lysis Buffer)是采用一種經(jīng)典的裂解方法獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可用于PAGE電泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。 Weak RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
伊勢久RIPA裂解液（強）的主要由Tris、NP40、deoxycholate等組成，有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
組成：
產(chǎn)品名稱 | PC012-100ml | PC012-500ml |
RIPA 裂解液（強） | 100ml | 500ml |
PMSF100mM | 1.5ml | 5ml |
使用說明書 | 一份 |
存儲條件：
RIPA裂解液保存于-20℃。12個月有效期。
操作步驟(僅供參考)：
無需配制，直接使用。
(一)貼壁培養(yǎng)細胞
2、 去除貼壁細胞的培養(yǎng)液，低速離心，棄上清。
3、 按照6孔板每孔加入150～250 ul含有PMSF的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于細胞內(nèi)，細胞就會被裂解/如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應置于冰上或4℃裂解。 通常裂解液作用于細胞1～3秒內(nèi)，細胞就會被裂解。
4、 離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。。
2、 去除貼壁細胞的培養(yǎng)液，低速離心，棄上清，留取沉淀。
3、 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液作用于細胞內(nèi)，細胞就會被裂解/如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應置于冰上或4℃裂解。
4、 離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后，使用前取適量裂解液加入PMSF，使其最終濃度為1mM。
2、 低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。
3、 用手指輕彈細胞，使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Weak RIPA Lysis Buffer。
4、 4℃離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(三)組織樣本
1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，使用前取適量裂解液加入PMSF，使其最終濃度為1mM。
2、 把組織剪切成細小的碎片，越小越好。
3、 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
3、 按20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。
4、 離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
注意事項：
1、 去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減 少裂解液的用量。
3、 在培養(yǎng)細胞的裂解中，如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/離心管，然后再裂解。少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接粗，相對比較容易裂解充分。
4、 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。
5、 溶解Enhanced RIPA Lysis Buffer r時，應盡量縮短溶解時間，避免裂解液中的有效成分失效。
6、 細胞裂解的操作步驟，應置于冰上或4℃進行。
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