簡(jiǎn)要介紹

DASPEI是一種苯乙烯染料，用于活細(xì)胞的線粒體染色。

DASPEI具有較大的熒光斯托克斯位移，用作膜電位探針時(shí)被攝取速度相對(duì)較慢。

體內(nèi)外DASPEI可用來鑒定幾種不同類型的表皮細(xì)胞，包括真骨魚內(nèi)的表皮電感受器、機(jī)械刺激感受器和氯細(xì)胞，以及兩棲動(dòng)物的機(jī)械刺激感受器。

DASPEI能用來標(biāo)記斑馬魚幼蟲的毛細(xì)胞。

物理性質(zhì)

【英文名稱】：2-[4-(Dimethylamino)styryl]-1-ethylpyridinium iodide

【CAS NO】：3785-01-1

【分子式】：C17H21IN2

【分子量】：380.27

【熔點(diǎn)】：267 °C

【狀態(tài)】：橙色固體

【Ex/Em】：461/589nm

【溶解性】：溶于DMSO

【純度】：≥95%

【儲(chǔ)存條件】：-20℃避光干燥

使用方法

1.DASPEI 工作液的配制

（1）制備儲(chǔ)存液

用 DMSO 配制 10 mM 的 DASPEI

注：DASPEI 儲(chǔ)存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。

（2）工作液的配制

用預(yù)熱好的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基或 PBS 稀釋儲(chǔ)存液，配制成 5-10 μM 的 DASPEI 工作液。

注：請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整 DASPEI 工作液濃度，且現(xiàn)用現(xiàn)配。

2. 細(xì)胞染色 (懸浮細(xì)胞)

（1）離心收集細(xì)胞，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。細(xì)胞密度在1×106/mL。

（2）加入 1 mL DASPEI 工作液，室溫孵育 30-60 分鐘。

（3）400 g，離心 3-4 分鐘，棄去上清。

（4）加入 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次 5 分鐘。

（5）用 1 mL 無血清培養(yǎng)基或 PBS 重懸細(xì)胞后，使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行觀察。

3. 細(xì)胞染色 (貼壁細(xì)胞)

（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移出蓋玻片，吸除多余培養(yǎng)基。

（3）加入 100 μL 染料工作液，輕輕晃動(dòng)使其完全覆蓋細(xì)胞，孵育30-60 分鐘。

（4）吸去染料工作液，用培養(yǎng)基洗 2-3 次，每次 5 分鐘，使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。

注意事項(xiàng)

熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

濃度控制可能存在影響，需嘗試測(cè)試不同濃度；實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建議設(shè)置空白對(duì)照及膜電位干擾對(duì)照。