簡要介紹
DASPEI是一種苯乙烯染料,用于活細胞的線粒體染色。
DASPEI具有較大的熒光斯托克斯位移,用作膜電位探針時被攝取速度相對較慢。
體內(nèi)外DASPEI可用來鑒定幾種不同類型的表皮細胞,包括真骨魚內(nèi)的表皮電感受器、機械刺激感受器和氯細胞,以及兩棲動物的機械刺激感受器。
DASPEI能用來標記斑馬魚幼蟲的毛細胞。
物理性質(zhì)
【英文名稱】:2-[4-(Dimethylamino)styryl]-1-ethylpyridinium iodide
【CAS NO】:3785-01-1
【分子式】:C17H21IN2
【分子量】:380.27
【熔點】:267 °C
【狀態(tài)】:橙色固體
【Ex/Em】:461/589nm
【溶解性】:溶于DMSO
【純度】:≥95%
【儲存條件】:-20℃避光干燥
使用方法
1.DASPEI 工作液的配制
(1)制備儲存液
用 DMSO 配制 10 mM 的 DASPEI
注:DASPEI 儲存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存。
(2)工作液的配制
用預(yù)熱好的無血清細胞培養(yǎng)基或 PBS 稀釋儲存液,配制成 5-10 μM 的 DASPEI 工作液。
注:請根據(jù)實際情況調(diào)整 DASPEI 工作液濃度,且現(xiàn)用現(xiàn)配。
2. 細胞染色 (懸浮細胞)
(1)離心收集細胞,加入 PBS 洗滌兩次,每次 5 分鐘。細胞密度在1×106/mL。
(2)加入 1 mL DASPEI 工作液,室溫孵育 30-60 分鐘。
(3)400 g,離心 3-4 分鐘,棄去上清。
(4)加入 PBS 洗滌細胞兩次,每次 5 分鐘。
(5)用 1 mL 無血清培養(yǎng)基或 PBS 重懸細胞后,使用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行觀察。
3. 細胞染色 (貼壁細胞)
(1)將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
(2)從培養(yǎng)基中移出蓋玻片,吸除多余培養(yǎng)基。
(3)加入 100 μL 染料工作液,輕輕晃動使其完全覆蓋細胞,孵育30-60 分鐘。
(4)吸去染料工作液,用培養(yǎng)基洗 2-3 次,每次 5 分鐘,使用熒光顯微鏡進行觀察。
注意事項
熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
濃度控制可能存在影響,需嘗試測試不同濃度;實驗設(shè)計建議設(shè)置空白對照及膜電位干擾對照。
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關(guān)鍵字: 3785-01-1; DASPEI線粒體熒光探針; DASPEI;