過氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒(紫外吸收法)說明書

微量法 100 管/96 樣 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義： 

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧 清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測定原理：

H2O2在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應(yīng)溶液 240nm 下的吸光度隨反應(yīng)時間而 下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研缽、 冰和蒸餾水 

粗酶液提?。?nbsp;

1、細菌、細胞或組織樣品的制備： 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10 4個）： 提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或 細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰 上待測。 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提 取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。 

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 240nm，蒸餾水調(diào)零。 

2、測定前將 CAT 檢測工作液在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。

3、準備 96 孔 UV 板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于 340nm 務(wù)必使用 UV 板）。 

4、在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μl 樣本和 190μl 工作液，混勻，記錄 240nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA＝A1-A2。

注意事項：出現(xiàn)負值怎么辦？

首先檢查吸光值是否超過 3，如果超過 3 很可能是沒有用 UV 板，請換用 UV 板。如果未超過 3，仍 然出現(xiàn)負值則檢查反應(yīng)過程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負值，可以將樣本用 提取液稀釋 10 倍后再檢測。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負值，說明該樣本測 不到該酶活。

溫馨提示：本產(chǎn)品不可用于臨床，詳詢客服。