NP69（人永生化鼻咽上皮細胞）
一、細胞基本屬性 |
細胞名稱 | NP69（人永生化鼻咽上皮細胞系） |
細胞別稱 | NP69SV40T; NP-69 |
細胞貨號 | ORC1233 |
種屬來源 | 鼻咽； SV40轉(zhuǎn)化；男性 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
背景簡介 | NP69細胞來源于用含有SV40大T抗原的PX8質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的活檢分離的原代鼻咽上皮細 胞的P1代培養(yǎng)物。 NP69細胞保留了正常鼻咽細胞的許多特征 ，包括角蛋白譜和對 TGF- β的反應(yīng) ， 同時具有在NPC中觀察到的許多遺傳特征。 NP69細胞是非致瘤性 的 ，并且表現(xiàn)出貼壁依賴性生長。 NP69細胞對于研究病毒相關(guān)腫瘤發(fā)生的機制特 別有用。 |
生物安全等級 | 1 |
細胞規(guī)格 | 1 × 106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測 | 無 |
培養(yǎng)基 | T25瓶10-12ml ； 10cm皿12-15ml |
培養(yǎng)條件 | 空氣 ，95% ； 二氧化碳 (CO2) ， 5% |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml ， 1ml每管 |
倍增時間 | ~12-30小時 |
凍存方法 | 1.消化并離心獲得細胞沉淀后 ，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞； 2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管； 3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒 ，放入-80度冰箱過夜 ，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序 凍存盒的實驗室 ，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min ，再-20 度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜 ，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
換液周期 | 2~3天 |
傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基； 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s ，吸走潤洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶 ，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層； 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化； 5.消化到細胞間隙變大 ，但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化； 6.混勻細胞 ，900rpm離心3-5min ，棄上清； |
| 7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞 ，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里； 8.補足完全培養(yǎng)基 ，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| H-2d |
注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性 ，若有異常 ，及時調(diào)整實驗方 案 |
二、細胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。
9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
關(guān)鍵字： NP69（人永生化鼻咽上皮細胞）;NP69;人永生化鼻咽上皮細胞;永生化鼻咽上皮;永生化鼻咽上皮細胞;
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