U251-RFP（紅色熒光蛋白標記的人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞）
細胞詳情 |
細胞名稱 | U251-RFP（紅色熒光蛋白標記的人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞） |
貨 號 | YB-71237HC-R |
組織來源 | 白種人，男性，腦 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
生長方式 | 貼壁生長 |
描 述 | 在ATCC和其他機構(gòu)進行的認證研究中，U-373 MG細胞系的身份一直受到質(zhì)疑。CTS自己通過STR分析以及形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)分析鑒定，U-373 MG與U-251 MG相同。 |
構(gòu)建信息 | U-251MG-RFP細胞為慢病毒感染U-251MG細胞得到的穩(wěn)定表達紅色熒光蛋白的細胞系。所用載體為HBLV-mcherry-PURO。 |
培養(yǎng)條件 | DMEM高糖（含丙酮酸鈉），10%FBS；空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養(yǎng) |
換液頻率 | 2-3天 |
傳代周期 | 3-5天 |
傳代比例 | 1:3 |
凍存液配方 | 95%完全培養(yǎng)基，5%DMSO |
安全性 | BSL-2 |
供應(yīng)限制 | 僅供研究之用。 |
二、細胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。
9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
本產(chǎn)品僅供科研使用.請勿用于醫(yī)藥,不能用于臨床治療診斷使用！
關(guān)鍵字： U251-RFP;紅色熒光蛋白標記的人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞;
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開發(fā)生產(chǎn)科研試劑和特色檢驗產(chǎn)品為方向，經(jīng)過兩年多的努力，已經(jīng)建立了免疫學(xué)和分子生物學(xué)的五個技術(shù)平臺，開發(fā)了ELISA/ELISpot酶聯(lián)免疫試劑盒、重組蛋白、熒光標記抗體、四聚體(Tetramer)特異性T細胞檢測試劑盒、Aimplex流式高通量多因子檢測、microRNA表達譜分析和功能研究等系列產(chǎn)品和服務(wù)，與國內(nèi)外免疫學(xué)、干細胞、傳染病和腫瘤研究及臨床檢驗領(lǐng)域的科學(xué)家們建立了良好的合作關(guān)系，形成了一定的品牌影響力。鈺博生物另建有七大技術(shù)服務(wù)平臺（ELISA定制服務(wù)，免疫學(xué)檢測服務(wù)、分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)、蛋白表達與純化技術(shù)服務(wù)、抗體制備技術(shù)服務(wù)、細胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、整體實驗課題服務(wù)。用專業(yè)的知識、專業(yè)的設(shè)備、專業(yè)的態(tài)度為客戶提供一站式實驗技術(shù)服務(wù)！