β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量，還能在正常的多糖代謝、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。
測定原理：
β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性。
組成：
產品名稱 | GMS033-100T/48S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：粉劑 | 1瓶 | -20℃ |
試劑二：液體 | 4ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 13ml | 4℃ |
說明書 | 一份 |
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、培養(yǎng)液等液體樣本：直接檢測
測定步驟：
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至400nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μl） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 25 |
|
蒸餾水 |
| 25 |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 10 | 10 |
迅速混勻，放入37℃保溫30min
充分混勻， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
β-GAL活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/ml），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.08×(ΔA +0.0027)
（4）按液體體積計算：
單位的定義：每ml樣本每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷V樣÷T
=39.89×(ΔA+0.0027)
V反總：反應體系總體積，0.07ml；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/ml），y為吸光值。
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.12×(ΔA +0.0027)
（4）按液體體積計算：
單位的定義：每ml樣本每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷V樣÷T=59.83×(ΔA+0.0027)
V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應時間，30min。
其他推薦產品：
刀豆球蛋白A（ConA）:11028-71-0
葡萄糖氧化酶:9001-37-0
胰α淀粉酶:9000-90-2
黃嘌呤氧化酶（來源于牛奶）:9002-17-9
β-葡萄糖苷酶（杏仁）:9001-22-3
乙酰膽堿酯酶（蒼蠅頭）:9000-81-1
胰蛋白酶抑制劑（大豆）:9035-81-8
Yeast tRNA(Carrier RNA):9014-25-9
另有各類實驗室緩沖液、溶液、生化試劑盒，量大價優(yōu)，誠邀經銷商！
歡迎聯(lián)系：18082049515（同微）QQ：2574511879
關鍵字： β-半乳糖苷酶（β-GAL）;β-GAL;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關試劑的研發(fā)和生產。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內的2000平米的生產、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產出的脲酶、tRNA轉運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術的應用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領域的標桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質的產品和專業(yè)服務，始終是我們努力的目標和方向。