產(chǎn)品介紹

Cell Meter 磷脂酰絲氨酸凋亡檢測試劑盒是一套用于監(jiān)測細胞活力的專業(yè)工具。細胞活力可通過多種參數(shù)進行評估，本試劑盒通過檢測磷脂酰絲氨酸（PS）外翻現(xiàn)象特異性監(jiān)測細胞凋亡過程。在凋亡發(fā)生時，PS會從細胞膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)移至外側(cè)，其細胞表面暴露可作為凋亡早期/中期的普適性標(biāo)志物，且該檢測信號早于細胞形態(tài)學(xué)變化出現(xiàn)。

Cell Meter 磷脂酰絲氨酸細胞凋亡檢測試劑盒采用專利小分子Apopxin? PS探針，該綠色熒光染料可被405 nm紫激光有效激發(fā)，并在~520 nm處發(fā)射強綠色熒光。本產(chǎn)品經(jīng)過專門優(yōu)化，適用于配備紫激光（Violet Laser）的流式細胞儀，特別適合用于細胞多色流式分析。

由于其大斯托克斯位移（Stokes Shift）及顯著提升的PS親和力，本試劑盒相比僅適用于顯微鏡或流式平臺的常規(guī)膜聯(lián)蛋白V凋亡檢測產(chǎn)品具有更強穩(wěn)定性，也可用于熒光酶標(biāo)儀檢測平臺。

樣品實驗方案

簡要概述

1.制備含測試化合物的細胞樣本（200 μL/樣本）

2.加入Apopxin Violet 500檢測溶液

3.室溫避光孵育30-60分鐘

4.使用配備520/40 nm濾光片（AmCyan通道）的流式細胞儀或 Violet濾光片的熒光顯微鏡分析細胞。

重要提示：實驗前需將100X碘化丙啶（組分C）于室溫解凍。

實驗操作流程

1.使用測試化合物處理細胞（如：Jurkat細胞用喜樹堿處理4-6小時）以誘導(dǎo)細胞凋亡。

注意：貼壁細胞因收獲過程可能損傷膜結(jié)構(gòu)，常規(guī)不建議流式檢測。但Casiola-Rosen和van Engelend等已建立相關(guān)方法

2.離心收集細胞，得到1-5×10⁵個細胞/管。

3.將細胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μLApopxin  Violet 450（組分A）加入細胞中。

（可選步驟）加入2 μL 100X碘化丙啶（組分C）標(biāo)記壞死細胞。

5.室溫避光孵育30至60分鐘。

可選：在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

6.使用配備520/40 nm濾光片（AmCyan通道）的流式細胞儀的流式細胞儀或 Violet濾光片的熒光顯微鏡分析細胞。

流式細胞儀分析方案

凋亡檢測

使用配備520/40 nm濾光片（AmCyan通道）的流式細胞儀定量Apopxin? Violet 500結(jié)合情況

細胞活力檢測

添加碘化丙啶后通過610/20 nm濾光片（PE-Texas Red通道）分析

注：貼壁細胞因收獲過程可能損傷膜結(jié)構(gòu)，常規(guī)不建議流式檢測。但Casiola-Rosen等學(xué)者已建立相關(guān)方法

熒光顯微鏡分析方案

1.吸取孵育后的細胞懸液，用檢測緩沖液洗滌1-2次，隨后用檢測緩沖液重新懸浮細胞。

2.將細胞懸液加至帶有蓋玻片的載玻片上。
*注：對于貼壁細胞，建議直接在蓋玻片上培養(yǎng)。完成Apopxin? Violet 500孵育后，用檢測緩沖液洗滌1-2次，重新加入檢測緩沖液覆蓋蓋玻片，倒置后觀察。也可選擇用2%甲醛固定細胞后鏡檢。*

3.使用紫光濾光片（Violet filter）觀察Apopxin? Violet 500標(biāo)記的凋亡細胞。

當(dāng)加入碘化丙啶時，通過TRITC濾光片檢測細胞活性。細胞膜表面的藍色熒光表明Apopxin? Violet 500與細胞表面PS的結(jié)合。

注：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！