超氧陰離子(OFR)試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
測定原理：
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA值可以計(jì)算樣品中O2－含量，反應(yīng)式為NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。
試劑組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | OX021-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 25ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 20ml | 4℃避光 |
試劑三：液體 | 20ml | 4℃避光 |
試劑四：氯仿 | （自備） | -- |
說明書 | 一份 |
自備儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。
超氧陰離子提?。?/span>
1、植物、動(dòng)物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。
3、血清或培養(yǎng)液：直接測定。
測定步驟：
| 空白管 | 測定管 |
樣本（μl） |
| 500 |
提取液（μl） | 500 |
|
試劑一（μl） | 400 | 400 |
混勻，37℃水浴20min：
試劑二（μl） | 300 | 300 |
試劑三（μl） | 300 | 300 |
混勻，37℃水浴20min
混勻，8000g，25℃，離心5min，小心吸取上層水相1ml， 1ml玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定A530。ΔA=A測定-A空白，空白管只要做一管。
超氧陰離子含量計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980
1. 組織：
（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=148.76×(ΔA +0.0027)÷W
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA +0.0027)÷W
（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細(xì)菌，真菌：
超氧陰離子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量
3. 血清或培養(yǎng)液
超氧陰離子 含量（nmol/ml）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ml·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V樣總：加入提取液體積，1 ml； V反總：反應(yīng)總體積，0.9ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.5ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；2： 2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。
注意事項(xiàng)：
1、吸光值大于2，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2、樣品制備好之后，立刻進(jìn)行測定，請(qǐng)勿將樣品進(jìn)行長時(shí)間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。
3、試劑四有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
關(guān)鍵字： 超氧陰離子(OFR)檢測試劑盒 ;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。