總抗氧化能力(FRAP 法)試劑盒說明書
微量法100T/96S
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫(yī)學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理:
在酸性環(huán)境下,抗氧化物質還原 Fe3+ -三吡啶三吖嗪(Fe3+ -TPTZ)產生藍色的 Fe2+ -TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。
組成:
產品名稱 | AO037-100T/96S | Storage |
提取液:液體 | 120ml | 4℃ |
試劑一:液體 | 20ml | 4℃避光 |
試劑二:液體 | 2ml | 4℃避光 |
試劑三:液體 | 2ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用):將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合,使用前 37℃預溫。
自備儀器和用品:
酶標儀、低溫臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品的制備:
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 離心10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超過30 d)后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
(3) 細胞樣品
按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入1ml 提取液),冰浴超聲波破碎(功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至593nm。
樣本測定
試劑名稱(μl) | 空白管 | 測定管 |
樣品 |
| 10 |
提取液 | 10 |
|
混合液 | 190 | 190 |
充分混勻,反應 20min,于 96 孔板,測定 593nm 吸光值,△A= A 測定-A 空白 |
總抗氧化能力計算公式:
標準曲線:y = 1.2416x + 0.0134 R2 = 0.9996 x:Trolox 濃度(μmol/ml)
y:吸光值差值△A
單位定義:用從標準曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的總抗氧化能力。
(1)按樣本質量計算
總抗氧化能力(μmol Trolox/g 鮮重)=(△A-0.0134)÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.8054×(△A-0.0134)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
總抗氧化能力(μmol Trolox/mg prot)=(△A-0.0134)÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)
=0.8054×(△A-0.0134)÷Cpr
(3)按細胞計算
總抗氧化能力(μmol Trolox/104cell)=(△A-0.0134)÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細胞數(shù)
量(萬個))
= 0.8054×(△A-0.0134)÷ 細胞數(shù)量(萬個)
(4)按液體體積計算
總抗氧化能力(μmol Trolox/ml)=(△A-0.0134)÷1.2416
=0.8054×(△A-0.0134)
V 樣總:加入提取液體積,1 ml;V 樣:反應中樣品體積,10μL;W:樣品質量,g;
Cpr:樣本蛋白濃度,mg/ml
注意事項:
1. 試劑二對人體有刺激性,請采取適當?shù)姆雷o措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴乳膠手套操作。
2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑,否則對本試劑盒的檢測結果產生干擾。
3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應的還原劑
關鍵字: 總抗氧化能力檢測試劑盒;
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我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內的2000平米的生產、研發(fā)基地已建成投入運行,其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心,現(xiàn)已生產出的脲酶、tRNA轉運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產品,熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念,聚焦于前沿生物技術的應用和創(chuàng)新,努力成為生物科技領域的標桿企業(yè)。堅持以客戶為中心,致力于為中國的科研工作者提供高品質的產品和專業(yè)服務,始終是我們努力的目標和方向。