產品簡介
G6PDH可催化葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate，G6P)轉化為6-磷酸葡萄糖酸內脂(6-phosphoglucon ate，6-PG)，這是磷酸戊糖途徑(pentose phosphate pathway，PPP)的第一個步驟，也是該途徑的限速步驟。磷酸戊糖途徑對于NADPH(還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，也稱為還原型輔酶II)和戊糖的生成至關重要。NADPH對于通過GSH的再生來調控氧化還原平衡以及脂肪酸生物合成來說都至關重要。所以G6PDH的缺乏會導致由于不能生成NADPH而引起的一些疾病，如新生兒黃疸、非免疫性溶血性貧血等。
產品特點
★ WST-8是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其他MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT被一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實驗結果更加穩(wěn)定。
★ WST-8和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
★ WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。
★ 本試劑盒使用便捷，靈敏度高，線性范圍寬?？梢悦靠缀康椭?/span>0.05mU的G6PDH，1mU/ml(0.05mU/孔)至500mU/ml(25mU/孔)之間呈現良好的線性關系。使用細胞、組織等的裂解液即可進行檢測，無需分離純化細胞、組織或其它樣品中的G6PDH。
檢測原理
G6P在G6PDH的作用下氧化生成6-PG，在這一反應過程中NADP+被還原為NADPH，生成的NADPH在電子耦合試劑1-mPMS(1-Methoxy-5-methylphenaziniumMethylSulfate)的作用下將WST-8還原生成橙黃色的formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反應體系中生成的formazan與樣品中G6PDH的活性呈正比關系。WST-8法檢測G6PDH的原理參考下圖：
產品組分
編號 | 產品名稱 | 包裝規(guī)格（100T） | 保存方式 |
試劑一 | 反應緩沖液 | 5.5ml | -20℃ |
試劑二 | G6PDH底物 | 220μl | -20℃ |
試劑三 | 顯色液 | 220μl | -20℃，需避光保存。 |
試劑四 | G6PDH(0.25U/μl) | 25μl | -20℃ |
試劑五 | G6PDH提取液 | 50ml | -20℃ |
耗材一 | 96 孔酶標板 | 1 板 | RT |
耗材二 | 96 孔覆膜 | 2 張 | RT |
保存條件
未拆封的試劑盒可在 -20℃保存12個月。
注意事項
1. 經檢測本試劑盒中的G6PDH(細菌來源)室溫存放72小時或反復凍融5次不影響其酶活性。但對于不同物種的G6PDH是否能耐受長時間的室溫存放或反復凍融須自行測試，初次檢測時盡量使用新鮮制備的樣品。
2. 由于G6PDH提取液略顯粘稠，以該提取液作為稀釋液時，無論對標準品還是樣品進行稀釋，在稀釋過程中務必確保稀釋均勻，否則易造成實驗數據產生較大波動。
3. 在樣品加樣和混勻過程中，須盡量避免產生氣泡，以免影響最終的吸光度測定。
4. 如果需要測定樣品中G6PDH的絕對活力而又不能非常嚴格地控制反應溫度和反應時間，則每次檢測都需要設置標準曲線。
5. 如果樣品溶液中G6PDH活性過高或過低，不在試劑盒的線性檢測范圍內時，可適當調整樣品或者提取液的用量。
6. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
關鍵字： Glucose-6-Phosphate;Dehydrogenase;G6PDH;Assay;Kit;WST-8;葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性;WST-8法;試劑盒
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