人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶
U-87MG+LUC
該細(xì)胞系由PontenJ等建立,源于惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤。裸鼠皮下接種可成瘤。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。細(xì)胞篩選:該細(xì)胞為已經(jīng)構(gòu)建好穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。 建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
神經(jīng)膠質(zhì)瘤
貼壁細(xì)胞
上皮樣
DMEM+10%FBS+1%P/S
90%FBS+10%DMSO,現(xiàn)配現(xiàn)用
液氮保存
1:2-1:3
2-3 次/周
注意事項(xiàng)
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