產(chǎn)品簡介:
植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀,常以糖含量作為重要指標(biāo),單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,具有還原性,屬于還原糖;多糖和蔗糖等屬于非還原糖,可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性,通過測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。
BIOISCO DNS 試劑(Ghose 法)由氫氧化鈉、3,5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、酚等配制而成,DNS 濃度為 6.3g/L,是植物總糖和還原糖檢測(硝基水楊酸法)的成分之一,其檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系,在 540nm 處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度,該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系,利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量。DNS 試劑也常用果膠酶、淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶等的活性測定。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
儲存條件:
12個月內(nèi)有效。
自備材料:
1、蒸餾水、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液
2、剪刀、勻漿器或研缽、50ml離心管、離心機、水浴鍋或恒溫箱、分光光度計、比色皿
操作步驟(僅供參考):
1、還原糖的提取:
(1)稱取植物樣品 0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約 3mL 勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用 12mL蒸餾水沖洗研磨器 2-3 次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
(2)50°C 水浴 30min,并不時攪拌,以便還原糖徹底浸出。
(3)將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50mL 離心管,4000g 離心 5min。
(4)留取上清液,向沉淀中加入 20mL 蒸餾水,混勻,再次 4000g 離心 5min。
(5)留取上清液,將二次獲得的上清液合并,用蒸餾水定容至 100mL(提取液),混勻,作為還原糖待測液。
2、總糖的水解和提?。?/span>
(1)稱取植物樣品 0.5-3g,剪碎,加入蒸餾水約 3mL 勻漿,轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中,用 12mL蒸餾水沖洗研磨器 2-3 次,洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
(2)向容器中加入 10mL 6M 鹽酸溶液,攪拌均勻,煮沸 30min,并不時攪拌。
(3)取兩滴滴加于載玻片上,滴加一滴顯色液,檢查水解是否完全,如已經(jīng)水解完全,則不顯示藍(lán)色。
(4)水解完畢后,冷卻至室溫,加入 6M 氫氧化鈉溶液,使溶液 pH 至 7.4,用蒸餾水定容至
100mL,混勻,4000g 離心 5min 或過濾。
取上清或濾液 10mL,用蒸餾水定容至 100mL,成稀釋 1000 倍的總糖水解液(提取液),取 1mL 總糖水解液,測定其還原糖的含量。
3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:取干凈離心管或試管,按下表進(jìn)行操作,以 0 號調(diào)零,檢測 540nm
處吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。
加入物質(zhì)(mL) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/mL) | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸餾水 | 1.0 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
DNS 試劑 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
沸水浴中準(zhǔn)確煮沸 5min,取出,自來水冷卻至室溫。 |
蒸餾水 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 |
相當(dāng)于葡萄糖量 | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
4、還原糖測定:取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1mL,分別加入 DNS 試劑 2mL,
其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作,540nm 處測定各管的吸光度。
計算公式:
還原糖的百分含量:
還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100
總糖的百分含量:
總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9
式中:C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)
VT=提取液的體積(ml)
m=植物樣品的質(zhì)量(mg)
Vs=測定時用的樣品體積(ml)
注意事項:
該試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降,盡量避光保存。
稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時,應(yīng)小心操作,避免傷人。
一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為 11.6M,應(yīng)稀釋至 6M 后使用。
待測樣本如不能及時測定,應(yīng)置于 2~8℃保存,3 天內(nèi)穩(wěn)定。
如果樣品還原糖濃度過高,應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
總糖計算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用,×0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中,扣除水解時所消耗的水量。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
試劑開封后請盡快使用,以防影響后續(xù)實驗效果。
本產(chǎn)品僅供科研使用,嚴(yán)禁它用。
其他推薦產(chǎn)品:
| SCE044 | AO染色液(1mg/ml) |
| SCE034 | DAPI染色液(1mg/ml) |
| SO040 | Lillie二價鐵染色液 |
| BO622 | NBT染色液(0.5mg/ml,PH7.8) |
| SN001 | TTC染色液(1%) |
| SN002 | TTC染色液(2%) |
| SCE057 | 中性紅染色液(液泡系專用) |
| SE005 | 乙酰膽堿酯酶染色液(亞鐵氰化銅法) |
| SO063 | 亮綠染色液(2%) |
| SNA001 | 吖啶橙染色液(1mg/ml) |
關(guān)鍵字: DNS試劑;Ghose法;
伊勢久(江蘇連云港)生物科技有限責(zé)任公司,成立于2019年,坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦,主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行,其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心,現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品,熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念,聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新,努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心,致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù),始終是我們努力的目標(biāo)和方向。