產(chǎn)品用途：

用于體外定量檢測小鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中活化蛋白C(APC)的含量 。

重要提示：僅供科研實驗使用，不得用于臨床診斷。

保存條件與有效期：

保存條件：2-8℃冷藏保存 。

有效期：通常為6個月。

檢測原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA) ：

預(yù)先用純化的抗小鼠APC抗體（捕獲抗體）包被微孔板。

加入待測樣本或標準品，樣本中的APC與包被抗體結(jié)合。

洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)。

加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗小鼠APC抗體（檢測抗體），形成“固相捕獲抗體-抗原(APC)-酶標檢測抗體”復(fù)合物。

再次洗滌去除未結(jié)合的酶標抗體。

加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺），在HRP催化下顯色（藍→黃）。

加入終止液（通常是硫酸）終止反應(yīng)。

在450nm波長下測量吸光度(OD值)。

樣本中APC濃度與OD值成正比，通過標準曲線計算濃度 。

樣本處理要求 (關(guān)鍵步驟)：

血清：全血標本室溫放置約2小時或4℃過夜后，1000×g離心20分鐘，取上清待測。避免反復(fù)凍融，可分裝于-20℃或-80℃長期保存 。

血漿：使用適當(dāng)?shù)目鼓齽ㄈ?/span>EDTA,肝素）收集全血，混勻后按血清處理方法離心取上清 。

組織勻漿/細胞上清：需常規(guī)處理后按說明離心取上清檢測 。

檢測范圍：

典型檢測范圍：0.5 ng/mL - 12 ng/mL（96孔板） 。

實驗注意事項 (關(guān)鍵技術(shù)點)：

表面效應(yīng)：

固相載體（如聚苯乙烯酶標板）通過物理吸附包被蛋白抗原（如包被抗體）時，可能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象和抗原性發(fā)生改變 。

這種改變可能直接影響ELISA結(jié)果的準確性，造成假陰性或假陽性 。

抗體固相化后也可能因攤開、不均分布、構(gòu)象變化而影響其活性 。

關(guān)鍵對策：

嚴格遵循試劑盒操作步驟，精確控制反應(yīng)時間和溫度。

確保徹底洗滌，避免非特異性結(jié)合。

使用精確的移液器和操作技巧。

設(shè)置合理的復(fù)孔、陰性對照、陽性對照和標準品，確保結(jié)果可靠性。

仔細閱讀實際購買的試劑盒說明書，了解其特定的注意事項。

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