異硫氰酸熒光素-辣根過氧化物酶/FITC-HRP/Fluorescein Isothiocyanate-Horseradish Peroxidase/ HRP-FITC/雙標記酶-熒光探針(兼具催化與熒光信號)
FITC-HRP由兩部分組成:FITC熒光基團和HRP酶蛋白。FITC是一種經典的綠色熒光染料,其最大激發(fā)波長約為490 nm,最大發(fā)射波長約為520 nm27。HRP是一種從辣根中提取的過氧化物酶,分子量約44 kDa,能催化過氧化氫分解并氧化底物產生顯色或化學發(fā)光信號67。兩者通常通過FITC的異硫氰酸酯基團(-N=C=S)與HRP分子表面的賴氨酸殘基氨基反應形成穩(wěn)定的硫脲鍵連接16。該復合物的核心優(yōu)勢在于雙重信號輸出:熒光信號:FITC提供綠色熒光,適用于熒光顯微鏡、流式細胞術等直接成像檢測23。酶催化信號:HRP可催化TMB、DAB等底物產生顏色變化或化學發(fā)光,實現(xiàn)信號放大,檢測靈敏度可達pg級。.
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