商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 解脲支原體(UU)檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 檢測(cè)方法 | 熒光PCR法 |
貨號(hào) | XG-P1265 | 應(yīng)用范圍 | 核酸的定性檢測(cè) |
規(guī)格 | 50T | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
檢測(cè)意義： 解脲支原體是一種常見的病原體，主要引起非淋菌性尿道炎，并與前列腺炎、附睪炎、陰道炎、宮頸炎等疾病相關(guān)，可能導(dǎo)致不孕不育、流產(chǎn)及新生兒感染。
該試劑盒適用于臨床輔助診斷、流行病學(xué)調(diào)查和療效評(píng)估。 方法學(xué)： 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，通常采用TaqMan探針法或SYBR Green染料法，以前者更為特異和常用。
二、 檢測(cè)原理（核心技術(shù)）
本試劑盒基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。其核心在于對(duì)PCR擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，通過熒光信號(hào)的變化來判定樣本中是否含有UU的特異性DNA片段。
以TaqMan探針法為例：
核酸提取： 從臨床樣本中提取總核酸（包括可能存在的UU DNA）。
PCR擴(kuò)增與熒光信號(hào)產(chǎn)生：
特異性引物： 針對(duì)UU基因組中高度保守的特異性序列（如尿素酶基因或MB抗原基因）設(shè)計(jì)一對(duì)引物。
特異性熒光探針： 設(shè)計(jì)一條與靶序列互補(bǔ)的寡核苷酸探針，其5‘端標(biāo)記一個(gè)報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記一個(gè)淬滅基團(tuán)。當(dāng)探針完整時(shí)，淬滅基團(tuán)會(huì)抑制報(bào)告基團(tuán)發(fā)光。
工作流程（每個(gè)循環(huán)）：
變性： 高溫（~95℃）使DNA雙鏈解離為單鏈。
退火： 降溫（~55-60℃）使引物和探針同時(shí)與模板DNA結(jié)合。
延伸： Taq DNA聚合酶沿模板合成新鏈。當(dāng)合成遇到探針時(shí)，其5‘→3’外切核酸酶活性會(huì)將探針?biāo)馇袛唷?/p>
熒光釋放： 報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，從而發(fā)出熒光。每擴(kuò)增一條DNA鏈，就釋放一個(gè)熒光信號(hào)。熒光強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的積累量成正比。
實(shí)時(shí)檢測(cè)： 熒光PCR儀在每個(gè)循環(huán)結(jié)束后檢測(cè)熒光強(qiáng)度。隨著擴(kuò)增循環(huán)進(jìn)行，熒光信號(hào)指數(shù)級(jí)增長，形成一條“S”型擴(kuò)增曲線。
陽性判定： 當(dāng)熒光信號(hào)強(qiáng)度超過預(yù)先設(shè)定的閾值線時(shí)，所對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)稱為Ct值。Ct值與起始模板中UU DNA的含量成反比。
三、 試劑盒組成（示例）
UU PCR反應(yīng)液： 含有緩沖液、dNTPs、Mg2?等。
Taq酶混合物： 包含熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶。
UU熒光探針引物混合液： 含有針對(duì)UU的特異性引物和探針（報(bào)告基團(tuán)通常為FAM或VIC）。
陽性對(duì)照： 含有UU目標(biāo)基因片段的質(zhì)粒DNA。
陰性對(duì)照： 無核酸酶水。
說明書
【用戶需自備】
核酸DNA提取試劑盒
無核酸酶水、離心管、帶濾芯吸頭
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
微量離心機(jī)、移液器、生物安全柜/超凈工作臺(tái)
四、 操作流程
總流程：樣本采集與處理 → DNA提取 → 配制反應(yīng)體系 → 上機(jī)運(yùn)行 → 結(jié)果分析
樣本采集與處理：
尿道/宮頸拭子： 將采集后的拭子浸入無菌生理鹽水或樣本保存液中，充分振蕩后棄去拭子，取液體進(jìn)行提取。
尿液： 取清晨首次尿或間隔4小時(shí)以上的中段尿，離心取沉淀進(jìn)行提取。
DNA提取：
使用商品化的基因組DNA提取試劑盒，嚴(yán)格按照說明書操作。最終將DNA溶于適量無核酸酶水中。
關(guān)鍵點(diǎn)： 嚴(yán)格無菌操作，防止交叉污染；尿液樣本需新鮮或妥善保存于-20℃。
反應(yīng)體系配制（以25μL體系為例）：
在無菌PCR管中，按以下順序加入：
PCR反應(yīng)液 12.5 μL
探針引物混合液 2.5 μL
提取的DNA模板 5-10 μL
用無核酸酶水補(bǔ)足至 25 μL。
蓋緊管蓋，短暫離心混勻。
PCR擴(kuò)增程序：
將反應(yīng)管放入熒光PCR儀，設(shè)置以下程序：
階段1：預(yù)變性 95℃ for 2-5分鐘。
階段2：循環(huán)擴(kuò)增（40-45個(gè)循環(huán)）
95℃ for 15秒 （變性）
60℃ for 30-60秒 （退火/延伸，在此階段采集熒光信號(hào)）
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關(guān)鍵字： 解脲支原體;檢測(cè)試劑盒;熒光PCR法;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物專注于實(shí)驗(yàn)室和公共衛(wèi)生領(lǐng)域，利用互聯(lián)網(wǎng)、數(shù)據(jù)分析及自動(dòng)化技術(shù)，包括實(shí)驗(yàn)室固定資產(chǎn)、儀器設(shè)備、生物樣本、化學(xué)品、試劑、配件耗材、環(huán)境、儀器自動(dòng)化和高通量篩選等一體化綜合管理平臺(tái)。不斷為各行業(yè)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞生命學(xué)產(chǎn)品、技術(shù)服務(wù)、免疫學(xué)和分子學(xué)產(chǎn)品，截止至2024年5月，西格生物已為生命科學(xué)、檢驗(yàn)檢測(cè)、化工材料、科研院所、政府機(jī)構(gòu)多行業(yè)300余家知名客戶提供實(shí)驗(yàn)室完整解決方案。本著幫助用戶實(shí)現(xiàn)“讓科研場(chǎng)所更智能、讓科研人員更專注、讓科學(xué)服務(wù)更高效“的愿景，西格生物將繼續(xù)在實(shí)驗(yàn)室科研產(chǎn)品領(lǐng)域持續(xù)發(fā)力，更加重視本土化，建構(gòu)通用性高、適應(yīng)性好、模塊搭配靈活，能快速響應(yīng)客戶需求的產(chǎn)品。