NCM460（人正常結(jié)腸上皮細胞系）
| 一、細胞基本屬性 |
| 細胞名稱 | NCM460（人正常結(jié)腸上皮細胞系） |
| 細胞別稱 | NCM460 |
| 商品貨號 | YB-75839HC |
| 種屬來源 | 人 |
| 組織來源 | 結(jié)腸 |
| 生長特性 | 貼壁生長 |
| 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
| 生物安全等級 | 1 |
| 細胞規(guī)格 | 1 × 106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
| 支原體檢測 | 無 |
| 保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-1642 BCRC; 60050 BCRJ; 0145 ECACC; 90020104 |
| 培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋ 10% FBS＋ 1% P/S |
| 培養(yǎng)條件 | 95%空氣+5%CO2 ，溫度： 37℃ |
| 凍存條件 | 60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO |
| 傳代比例 | 1:2-1:6 ，每 2-3 天換液一次 |
| 安全性 | 所有腫瘤細胞和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性 ，建議在二級生物安全 臺內(nèi)操 作 ，并做好個人防護。 |
| 用途 | 僅供科研使用 |
二、細胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇細胞:以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考 ，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍 ，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘 ，棄去上清液 ，補 加 1-2m L 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培 養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜 (或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中 ，加入約 8ml 培養(yǎng)基 ，培養(yǎng)過夜) 。第二天換液并 檢 查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90% ，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清 ，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1ml 消化液 ( 0.25%Trypsin-0.53m M EDTA) 于培養(yǎng)瓶中 ，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘， 然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況 ，若細胞大部分 變圓并脫落 ，迅速拿回操作臺 ，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加 少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基 ，輕輕打勻后吸出 ，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘 ，棄去上清液 ，補加 1 -2m L 培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按 1： 2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時 ，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液 ，裝入無菌離心管中 ， 1000 rpm條件下離心4 min ，棄去上清液 ，用PBS清洗 一遍 ，棄盡PBS ，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液 ，使細胞密度5× 106~ 1 × 107/mL ，輕輕混勻 ，每支凍存管凍存 1mL細胞懸液 ，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱 ， 24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1 . 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養(yǎng)液是否有漏液 、渾濁等現(xiàn)象 ，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請 及時和我們聯(lián)系。
2 . 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關(guān)信息 ， 如細胞形態(tài) 、 所用培養(yǎng)基 、 血清比例、 所需 細胞因 子等 ，確保細胞培養(yǎng)條件一致 ，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題 ，責任由 客戶自行承擔。
3 . 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面 ， 顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。 因運輸問題 ， 部分細胞由于溫度 變化及 劇烈碰撞死亡破碎形成碎片 ，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后 ， 75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4 h。
4 . 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ， 900 rpm- 1000 rpm 離心 3 min ，棄上 清。加
5 mL PBS 重懸細胞 ，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min ，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞 ，并接種 到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中 ，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5 . 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6 . 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態(tài) ，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。 由 于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況 ，請及時和我們聯(lián)系 ， 告知細胞 的具體情況 ， 以 便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注： 運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞 ，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配 制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。
9. 注意：1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
關(guān)鍵字： NCM460;人正常結(jié)腸上皮細胞系;
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開發(fā)生產(chǎn)科研試劑和特色檢驗產(chǎn)品為方向，經(jīng)過兩年多的努力，已經(jīng)建立了免疫學和分子生物學的五個技術(shù)平臺，開發(fā)了ELISA/ELISpot酶聯(lián)免疫試劑盒、重組蛋白、熒光標記抗體、四聚體(Tetramer)特異性T細胞檢測試劑盒、Aimplex流式高通量多因子檢測、microRNA表達譜分析和功能研究等系列產(chǎn)品和服務(wù)，與國內(nèi)外免疫學、干細胞、傳染病和腫瘤研究及臨床檢驗領(lǐng)域的科學家們建立了良好的合作關(guān)系，形成了一定的品牌影響力。鈺博生物另建有七大技術(shù)服務(wù)平臺（ELISA定制服務(wù)，免疫學檢測服務(wù)、分子生物學技術(shù)服務(wù)、蛋白表達與純化技術(shù)服務(wù)、抗體制備技術(shù)服務(wù)、細胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、整體實驗課題服務(wù)。用專業(yè)的知識、專業(yè)的設(shè)備、專業(yè)的態(tài)度為客戶提供一站式實驗技術(shù)服務(wù)！