谷胱甘肽還原酶(GR)測定試劑盒/分光光度法/48樣
測定意義:
GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關鍵酶之一(通常昆蟲中GR 被 TrxR 取代)。GR 催化 NADPH 還原 GSSG 生成 GSH ,有助于維持體內 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用,此外 GR 還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)途徑。
測定原理:
GR 能催化 NADPH 還原 GSSG 再生 GSH ,同時 NADPH 脫氫生成 NADP+;NADPH 在 340 nm有特征吸收峰,相反 NADP+在該波長無吸收峰;通過測定 340 nm 吸光度下降速率來測定 NADPH 脫氫速率,從而計算 GR 活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水。
操作步驟:
1. 分光光度計預熱 30 min ,調節(jié)波長到 340 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑一置于 25℃(普通物質)或者 37℃(哺乳動物)中預熱 30min。
3. 測定管:取 1mL 石英比色皿,依次加入 50μL 試劑三,100μL 試劑二, 750μL 試劑一,100μL 上清液,混勻,于 340nm 迅速測定初始吸光度和 180 s 吸光度,記為 A 測 1 和 A 測 2,△A 測定管=A 測 1 -A 測2 。(注意 :加完上清液后迅速混勻測定)。
注 意:
(1)樣品處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力,勻漿液避免反復凍融。
(2)試劑二和試劑三須現配現用,配制完后,置于冰上,未使用完的 4℃保存,三天內使用完。
(3)測定前須先用 1~2 個樣做預實驗,哺乳動物組織一般須用試劑一稀釋 2~5 倍。
(4)細胞中 GR 活性測定時,細胞數目須在 300 萬-500 萬之間,細胞中 GR 的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。
關鍵字: GR 試劑盒 ; GR ELISA KIT ; GR ELISA試劑盒 ;
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