基本信息
化學(xué)名稱：1,1'- 二十八烷基 - 3,3,3',3'- 四甲基吲哚菁高氯酸鹽。
分子式：C61H99ClN2O4。
分子量：959.91。
外觀：紅色或紫色或深藍(lán)色固體。
溶解性：溶于 DMF、DMSO 和乙醇。
熒光特性
激發(fā)和發(fā)射波長：其激發(fā)波長約為 644nm，發(fā)射波長約為 663nm，呈紅色熒光，可被 633nm 的氦 - 氖（He-Ne）激光激發(fā)。
熒光增強(qiáng)特性：DiD 在水中熒光強(qiáng)度很弱，進(jìn)入細(xì)胞膜后，與膜結(jié)合使其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)。
標(biāo)記特點(diǎn)
穩(wěn)定性高：DiD 分子含兩條 C18 飽和疏水長鏈，可深度嵌入細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層，形成穩(wěn)定的 “膜 - 染料” 復(fù)合物。熒光信號(hào)可在活細(xì)胞中維持 72-96 小時(shí)，細(xì)胞分裂或遷移時(shí)，膜熒光能均勻分配至子細(xì)胞。
特異性好：標(biāo)記后僅分布于細(xì)胞膜，呈現(xiàn)連續(xù)的紅色熒光環(huán)，內(nèi)吞率極低，遠(yuǎn)低于 DiI、DiO 等其他熒光染料。
低聚集性：分子結(jié)構(gòu)對(duì)稱性高，在細(xì)胞膜中不易發(fā)生疏水聚集，可清晰分辨細(xì)微膜結(jié)構(gòu)。
應(yīng)用場景
深層組織與活體成像：適合標(biāo)記腫瘤細(xì)胞觀察其在體內(nèi)的遷移與轉(zhuǎn)移，也可用于標(biāo)記腦片深層神經(jīng)元膜，觀察神經(jīng)元軸突投射路徑。
光敏感樣本的長時(shí)程示蹤：可用于標(biāo)記胚胎干細(xì)胞，追蹤其分化過程，或標(biāo)記斑馬魚受精卵細(xì)胞膜，觀察早期胚胎卵裂過程。
復(fù)雜多色實(shí)驗(yàn)與膜功能研究：可與其他熒光探針聯(lián)用，如標(biāo)記 T 細(xì)胞膜，觀察免疫突觸形成，或結(jié)合 FRET 技術(shù)，研究膜蛋白二聚化等。
使用注意事項(xiàng)
染色濃度：活細(xì)胞推薦濃度為 1-3μM，固定細(xì)胞可提高至 3-5μM。
成像保護(hù)：使用含抗淬滅劑的培養(yǎng)基，可減少染料光漂白，低溫保存可進(jìn)一步降低內(nèi)吞率。
參數(shù)設(shè)置：流式細(xì)胞術(shù)使用 633nm 激光激發(fā)，660/20nm 帶通濾光片收集信號(hào)；共聚焦顯微鏡選擇 633nm 激光，650-700nm 發(fā)射濾光片。
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