Streptavidin-TRITC:羅丹明標(biāo)記鏈霉親和素
Streptavidin-TRITC是四甲基羅丹明(TRITC)標(biāo)記的鏈霉親和素,是通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)將TRITC與鏈霉親和素結(jié)合形成的紅色熒光功能蛋白。鏈霉親和素作為生物素-親和素系統(tǒng)的核心組件,具有對(duì)生物素*高的親和力、低免疫原性和良好的生物相容性;TRITC作為常用紅色熒光染料,激發(fā)波長(zhǎng)約540-550nm,發(fā)射波長(zhǎng)約570-580nm,熒光顏色鮮艷的橙紅色,光穩(wěn)定性強(qiáng)、抗淬滅能力優(yōu)良,兩者結(jié)合后形成的Streptavidin-TRITC,兼具特異性親和結(jié)合功能和穩(wěn)定的紅色熒光示蹤能力,尤其適用于多色熒光成像實(shí)驗(yàn)。
其制備常采用異硫氰酸酯法,該方法反應(yīng)特異性強(qiáng)、偶聯(lián)效率高。TRITC分子中的異硫氰酸酯基團(tuán)可與鏈霉親和素分子上的游離氨基(主要為賴氨酸殘基氨基)發(fā)生特異性反應(yīng),形成穩(wěn)定的硫脲鍵,實(shí)現(xiàn)共價(jià)結(jié)合。反應(yīng)過(guò)程需嚴(yán)格控制條件:反應(yīng)體系pH值維持在8.0-9.0,此環(huán)境可促進(jìn)異硫氰酸酯基團(tuán)與氨基的反應(yīng),同時(shí)減少鏈霉親和素變性;反應(yīng)溫度控制在4℃,降低TRITC熒光淬滅風(fēng)險(xiǎn)和蛋白活性損失;精準(zhǔn)調(diào)節(jié)TRITC與鏈霉親和素的摩爾比(通常為2-5:1),確保標(biāo)記率適中。反應(yīng)完成后,通過(guò)凝膠過(guò)濾層析(如Sephadex G-25)純化,去除未結(jié)合的游離TRITC,獲得高純度的Streptavidin-TRITC產(chǎn)物,保證其生物活性和熒光性能。
Streptavidin-TRITC的核心應(yīng)用集中在多色熒光成像、免疫檢測(cè)和生物分子示蹤領(lǐng)域。在多色熒光成像實(shí)驗(yàn)中,由于其發(fā)射波長(zhǎng)與FITC等綠色熒光染料差異顯著,可與其他熒光標(biāo)記試劑搭配使用,實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)的同時(shí)檢測(cè),如細(xì)胞內(nèi)多種蛋白的共定位分析、組織切片中不同抗原的分布觀察;在免疫檢測(cè)領(lǐng)域,可作為信號(hào)放大試劑與生物素化一抗結(jié)合,通過(guò)紅色熒光實(shí)現(xiàn)目標(biāo)抗原的定位和定量檢測(cè),適用于免疫組織化學(xué)、免疫印跡等實(shí)驗(yàn);在生物分子示蹤領(lǐng)域,可與生物素化的核酸、多肽等結(jié)合,追蹤其在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、定位過(guò)程,為分子生物學(xué)機(jī)制研究提供直觀數(shù)據(jù);此外,還可用于流式細(xì)胞術(shù)對(duì)特異性細(xì)胞群體的分選和檢測(cè),提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。
使用Streptavidin-TRITC時(shí)需關(guān)注以下要點(diǎn):一是儲(chǔ)存條件,需避光、密封置于-20℃低溫環(huán)境保存,避免與氧化劑接觸,防止熒光染料氧化失效,建議分裝儲(chǔ)存避免反復(fù)凍融;二是檢測(cè)參數(shù)調(diào)節(jié),實(shí)驗(yàn)需使用匹配的熒光檢測(cè)設(shè)備,調(diào)整激發(fā)光(540-550nm)和發(fā)射光(570-580nm)波長(zhǎng),確保高效捕捉熒光信號(hào);三是多色成像優(yōu)化,需合理選擇搭配的熒光染料,避免發(fā)射波長(zhǎng)重疊導(dǎo)致信號(hào)干擾;四是活性驗(yàn)證,使用前通過(guò)與生物素化蛋白的結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其親和活性;五是純度驗(yàn)證,使用前通過(guò)凝膠電泳或HPLC驗(yàn)證產(chǎn)物純度,確保無(wú)游離TRITC污染;六是熒光保護(hù),體外實(shí)驗(yàn)可添加紅色熒光抗淬滅劑,延長(zhǎng)熒光信號(hào)壽命。
用途:科研
包裝:瓶裝
產(chǎn)地:西安瑞禧生物科技有限公司

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關(guān)鍵字: Streptavidin-TRITC;羅丹明標(biāo)記鏈霉親和素;
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