產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品TSA四標五色多重熒光染色試劑盒，適用于石蠟切片、冰凍切片、細胞爬片、細胞涂片、類器官等組織樣本的免疫熒光多重染色，尤其適用于相同來源一抗的多重熒光免疫標記，也可用于不同來源抗體的多重熒光免疫標記 。主要原理是基于酪胺信號放大（TSA， Tyramide signal amplification），以下簡稱TSA技術。TSA技術主要原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應（即熒光標記的酪胺鹽在 HRP催化 H2O2下形成共價鍵結合位點），產(chǎn)生大量的酶促反應，該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基（包括色氨酸、組氨酸、酪氨酸殘基）結合，在抗原-抗體結合部位形成大量的熒光素沉積，實現(xiàn)信號放大。本試劑盒使用多重熒光染料對酪胺進行標記，得到的熒光酪胺熒光強，信號穩(wěn)定，應用于多次重復免疫標記實現(xiàn)多重熒光染色。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品形態(tài) | 液體 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 20T、50T、100T |
儲存條件 | 2-8℃ |
運輸條件 | 低溫 |
有效期 | 12個月 |
組 分 | 規(guī) 格 | 稀 釋 比 例 |
20T | 50T | 100T |
TSA-CY3 | 10μL | 25μL | 50μL | 1：200 |
TSA-FITC | 10μL | 25μL | 50μL | 1：200 |
TSA-680 | 10μL | 25μL | 50μL | 1：200 |
TSA-430 | 10μL | 25μL | 50μL | 1：200 |
TSA稀釋液 | 8mL | 20mL | 40mL | 即用型 |
3%H2O2 | 2mL | 5mL | 10mL | 即用型 |
封閉液 | 8mL | 20mL | 40mL | 即用型 |
一抗稀釋液 | 8mL | 20mL | 40mL | 即用型 |
抗體洗脫劑 | 6mL | 15mL | 30mL | 即用型 |
HRP‐山羊抗兔/鼠IgG | 8mL | 20mL | 40mL | 即用型 |
DAPI染液 | 2mL | 5mL | 10mL | 即用型 |
抗熒光淬滅封片劑 | 2mL | 5mL | 10mL | 即用型 |
熒光素信息
熒光素名稱 | 激發(fā)波長(nm） | 發(fā)射波長(nm） | 顯微鏡下顏色 | 濾光片 |
TSA-FITC | 490 | 520 | 綠色 | FITC通道 |
TSA-CY3 | 550 | 570 | 橙紅色 | CY3通道 |
TSA-680 | 680 | 700 | 深紅色 | CY5/CY5.5通道 |
TSA-430 | 430 | 480 | 青色 | Aqua通道 |
注意事項
1. 一抗的選擇
1.1 一抗優(yōu)先選擇單克隆抗體，其次選擇多克隆抗體；
1.2 如果是小鼠樣本，盡量避開選擇小鼠來源一抗，若選擇小鼠一抗，二抗除了與一抗結合，還會結合組織內(nèi)源性的IgG，產(chǎn)生非特異性著色；
2. 若組織容易掉片，修復時可采用60℃水浴方式進行修復。
3. 與熒光二抗相比，TSA試劑盒有更高的靈敏度和更強的信號。因此一抗使用濃度需降低，一般在抗體說明書建議的稀釋比基礎上適當擴大稀釋倍數(shù)，以減少非特異性結合導致的背景熒光。建議設置一抗梯度濃度獲得最佳效果。
4. 如背景熒光較強，建議增加組織自發(fā)熒光淬滅步驟。
5. 為保證抗體洗脫效果及熒光多重標記效果，建議正式多重標記之前分別做各個抗體的TSA單標測試，確定每個抗體單標都能做出較理想的陽性后再根據(jù)單標測試結果去確定多標的抗原修復條件、抗體順序等實驗條件。
6. 如果有些抗體效價高，親和力較強，不易洗脫徹底，可增加洗脫次數(shù)。
7. 抗體洗脫液流動性強，片子未水平放置時，試劑易流出圈外，影響洗脫效果，需在操作過程注意切片平放。
8. 操作時需帶好手套，口罩，穿好實驗服，避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸到敏感區(qū)域，立即用大量清水沖洗。
關鍵字： mIHC試劑盒;TSA;酪氨;多重熒光;HRP;
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