用途：本試劑盒用于體外定量檢測兔血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的白介素9(IL-9)濃度。適用于科研實驗，不用于臨床診斷。具有高靈敏度（低背景、高特異性）、重復性好（批內(nèi)和批間變異系數(shù)<10%），廣泛用于免疫學檢測領(lǐng)域。

實驗原理

原理：采用雙抗體夾心法。具體過程：

酶標板預先包被純化的兔IL-9抗體（固相抗體）。

加入樣品后，形成抗原-抗體復合物。

加入HRP標記的兔IL-9抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。

洗滌后，加入TMB底物顯色，在HRP催化下呈藍色，酸性終止后轉(zhuǎn)為黃色。

使用酶標儀在450 nm波長下測量吸光度（OD值），OD值與樣品中的IL-9濃度成正比。標準曲線計算濃度。

操作步驟

準備工作：

平衡所有組分至室溫（約20-25°C）。

配制洗滌液：將30×濃縮洗滌液加蒸餾水稀釋30倍（如取1 ml濃縮液加29 ml水）。

制備標準曲線：用樣品稀釋液將凍干標準品溶解至1 ml（濃度為1,600 pg/ml），然后倍比稀釋為400、200、100、50、25、12.5、6.25 pg/ml系列濃度，同時設0 pg/ml空白對照（僅用稀釋液）。每個濃度點重復2孔。

加樣與孵育：

加標準品或樣本：每孔加入100 μl（標準品、樣品或空白對照）。

覆膜封板，37°C孵育1小時。

洗滌：棄去液體，每孔加入300 μl稀釋洗滌液，浸泡30秒后棄去，重復5次。

加酶標試劑：

每孔加入100 μl酶標試劑，覆膜后37°C孵育30分鐘。

再次洗滌5次（同上）。

顯色與終止：

每孔加入100 μl TMB底物液，避光室溫孵育15分鐘（或見藍色）。

加入50 μl終止液，輕搖混勻，終止反應（顏色轉(zhuǎn)為黃色）。

讀數(shù)和計算：

在加終止液后10分鐘內(nèi)，使用酶標儀在450 nm處讀取OD值。

標準曲線繪制：以標準品濃度為x軸，OD值為y軸，擬合曲線。樣品濃度通過曲線方程計算。

注意事項與特點

優(yōu)點：

高靈敏度、低背景、特異性強、重復性好（批間差異<10%）。

操作簡便，試劑穩(wěn)定（保質(zhì)期長），適合批量檢測。

注意事項：

僅供科研使用，不可用于診斷或治療。

標準品需新鮮配制，避免多次凍融（使用前反復顛倒助溶）。

操作時使用一次性手套，避免交叉污染；洗滌步驟要徹底。

顯色時間可能因環(huán)境變化調(diào)整，確保所有步驟同步進行。

敏感樣本建議復測，正常檢測范圍：6.25–400 pg/ml。

檢測性能：

廣泛的檢測范圍和最佳性能，可適應不同樣品類型。

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