商品屬性

產(chǎn)品概述

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Sandwich ELISA），用于體外定量檢測兔血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液或其他生物液體中的 Adipsin（又稱補體因子D，F(xiàn)actor D）。該蛋白是補體系統(tǒng)替代途徑的關鍵絲氨酸蛋白酶，在炎癥反應和代謝調(diào)節(jié)中具有重要作用。

檢測原理

包被：微孔板預包被抗兔Adipsin/Factor D單克隆抗體。

加樣：加入樣本或標準品，Adipsin/Factor D 與包被抗體結合。

檢測抗體：加入生物素標記的抗兔Adipsin/Factor D二抗，形成“抗體-抗原-抗體”復合物。

酶反應：加入鏈霉親和素-HRP（辣根過氧化物酶），與生物素結合。

顯色：加入TMB底物，HRP催化顯藍色。

終止：加入終止液，藍色轉為黃色。

讀數(shù)：在450nm波長下測定吸光度（OD值），Adipsin濃度與OD值正相關。

試劑盒組成

| 組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |

| 預包被微孔板 | 96孔（可拆） | 1塊 |

| 兔Adipsin標準品 | 凍干粉 | 2支 |

| 標準品稀釋液 | 1.5mL | 1瓶 |

| 生物素標記檢測抗體 | 100μL | 1瓶 |

| 辣根過氧化物酶-鏈霉親和素（SA-HRP） | 100μL | 1瓶 |

| 洗滌緩沖液（20×） | 30mL | 1瓶 |

| TMB顯色液 | 10mL | 1瓶 |

| 終止液（2M H?SO?） | 10mL | 1瓶 |

| 封板膜 | - | 4張 |

樣本要求

血清/血漿：采集后離心去除顆粒物，-20℃保存，避免反復凍融。

細胞上清：離心去除雜質(zhì)，立即檢測或-80℃保存。

建議稀釋倍數(shù)：通常為1:10~1:100（需預實驗確定）。

標準曲線范圍

0.156–10 ng/mL

靈敏度與精密度

最低檢測限（LOD）：≤ 0.05 ng/mL

批內(nèi)精密度：CV < 8%

批間精密度：CV < 10%

操作步驟

標準品復溶：用稀釋液配制梯度濃度（0, 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 ng/mL）。

加樣：100μL/孔標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。

洗板：洗滌液洗3次。

加檢測抗體：100μL/孔，37℃孵育60分鐘。

洗板：重復洗滌3次。

加SA-HRP：100μL/孔，37℃避光孵育30分鐘。

洗板：重復洗滌5次。

顯色：加90μL TMB，避光反應15~20分鐘。

終止：加50μL終止液。

讀數(shù)：立即測量450nm OD值（參考波長630nm）。

結果計算

繪制標準曲線（濃度 vs OD值），擬合4參數(shù)方程。

根據(jù)樣本OD值計算Adipsin濃度，乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項

關鍵提醒：

不同批次試劑不可混用。

TMB對光敏感，需避光操作。

避免洗滌交叉污染。

若樣本濃度過高，需進一步稀釋后重測。

保存條件

未開封：2–8℃保存，有效期12個月。

公司出售的產(chǎn)品