鈣離子熒光探針Cal-520 NHS酯優(yōu)勢  

1.低背景熒光：與Ca2?結合后顯著增強熒光信號，能有效降低背景干擾，提高檢測靈敏度。

2.多色兼容性：綠色熒光，適用于多通道成像

3.高效偶聯(lián)特性：含NHS活性基團，可直接偶聯(lián)抗體/IgG等生物分子

鈣離子熒光探針Cal-520 NHS酯標記實驗流程

此標記方案是為山羊抗小鼠IgG與Cal-520? NHS酯而開發(fā)的。對于您的特定蛋白質，您可能需要進一步優(yōu)化。

注意：每種蛋白質需要不同的染料/蛋白質比率，這還取決于染料的特性。過度標記蛋白質可能會對其結合親和力產生不利影響，而低染料/蛋白質比率的蛋白質共軛物會降低靈敏度。

運行共軛反應

1.以10:1的摩爾比（B液（染料）/A液（蛋白質））作為起始點：取95μL A液（假設蛋白濃度10mg/mL，MW~200kD，則濃度~0.05mM），加入5μL B液（10mM）。

注意：建議使用B液（染料）/A液（蛋白質）的10:1摩爾比。如果比例過低或過高，分別在5:1、15:1和20:1的染料/蛋白質比下確定合適的比例。

2.室溫震蕩反應30-60分鐘

純化步驟（Sephadex G-25柱示例）

1.按說明書預處理Sephadex G-25柱

2.上樣反應混合物（將反應混合物加載到Sephadex G-25柱的頂部。）（來自“運行共軛反應”）

3.樣品剛運行到樹脂表面下方時，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）洗脫

4.持續(xù)加入PBS緩沖液（pH 7.2-7.4）進行洗脫，直至目標樣品完全流出層析柱。合并含有染料-蛋白偶聯(lián)物的洗脫組分。

注意：

短期使用建議：如立即使用，必須用染色緩沖液適當稀釋偶聯(lián)物，按實驗需求分裝為單次使用量

長期保存方案：如需長期儲存，染料-蛋白偶聯(lián)物溶液需要濃縮或凍干。

注：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！