馬源性成分(Horse)檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
一、 核心概述：這是什么？用來(lái)做什么？
產(chǎn)品名稱： 馬源性成分檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
檢測(cè)目標(biāo)： 馬（Horse） 的特異性DNA片段。通過(guò)檢測(cè)線粒體細(xì)胞色素b基因或其他馬特有的基因組序列來(lái)實(shí)現(xiàn)。
方法原理： 實(shí)時(shí)熒光PCR法。利用馬物種特異的引物和熒光探針，對(duì)樣本DNA進(jìn)行特異性擴(kuò)增和檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 馬源性成分(Horse)檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 分類 | 熒光PCR |
貨號(hào) | XG-P1157 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
主要應(yīng)用場(chǎng)景：
食品真?zhèn)闻c摻假鑒別：
打假溯源： 檢測(cè)肉制品（如香腸、肉醬、熟食）是否被非法摻入馬肉， infamous 的“2013年歐洲馬肉風(fēng)波”就是典型案例。
標(biāo)簽真實(shí)性： 驗(yàn)證標(biāo)稱為“牛肉”、“驢肉”等的產(chǎn)品中是否含有未標(biāo)注的馬肉成分。
飼料安全監(jiān)控： 確保飼料中不含同源動(dòng)物成分，遵守畜牧業(yè)管理規(guī)定，預(yù)防特定疾病傳播。
化妝品及保健品監(jiān)管： 檢測(cè)產(chǎn)品中是否含有馬源成分（如胎馬血清、馬脂等），確保成分標(biāo)注真實(shí)，滿足宗教（如清真、猶太認(rèn)證）或消費(fèi)者偏好需求。
法醫(yī)學(xué)物種鑒定： 對(duì)未知生物樣本進(jìn)行物種來(lái)源鑒定。
二、 技術(shù)原理詳解：熒光PCR法如何工作？
樣本處理與DNA提取： 從待測(cè)樣品（如肉糜、飼料、化妝品）中提取總DNA。高質(zhì)量的DNA提取是成功檢測(cè)的基礎(chǔ)。
PCR反應(yīng)體系配制： 將提取的DNA模板與試劑盒內(nèi)的以下成分混合：
PCR反應(yīng)液： 含有針對(duì)馬特異性基因序列的引物和熒光探針（通常是TaqMan探針）。該探針標(biāo)記有FAM等報(bào)告熒光基團(tuán)。
內(nèi)參系統(tǒng)： 高質(zhì)量的試劑盒會(huì)采用雙重PCR設(shè)計(jì)，同時(shí)檢測(cè)：
目標(biāo)基因（馬）： 特異性靶標(biāo)。
內(nèi)參基因： 通常選用18S rRNA基因或ACTB基因等高度保守的序列。內(nèi)參基因探針標(biāo)記有VIC/HEX等不同于FAM的熒光基團(tuán)。內(nèi)參用于監(jiān)控整個(gè)檢測(cè)過(guò)程是否有效。
Taq DNA聚合酶： 催化DNA擴(kuò)增。
實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增與檢測(cè)：
將反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀中運(yùn)行程序。
儀器在每一個(gè)循環(huán)結(jié)束后，分別檢測(cè)FAM通道（馬成分）和VIC/HEX通道（內(nèi)參）的熒光信號(hào)強(qiáng)度。
當(dāng)目標(biāo)DNA被成功擴(kuò)增時(shí)，對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)會(huì)顯著增強(qiáng)，形成“S”型擴(kuò)增曲線。
結(jié)果判讀：
陽(yáng)性結(jié)果： FAM通道出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，且Ct值小于或等于說(shuō)明書規(guī)定的閾值（如Ct ≤ 35）。
陰性結(jié)果： FAM通道無(wú)擴(kuò)增曲線或Ct值大于閾值。
實(shí)驗(yàn)有效性判斷（關(guān)鍵）： 無(wú)論FAM通道結(jié)果如何，VIC/HEX通道（內(nèi)參）必須出現(xiàn)正常的擴(kuò)增曲線。這表明DNA提取成功，PCR反應(yīng)體系工作正常，無(wú)抑制物存在。如果內(nèi)參無(wú)擴(kuò)增，則本次檢測(cè)無(wú)效。
三、 試劑盒核心組分（示例）
PCR反應(yīng)預(yù)混液： 已包含針對(duì)馬成分和內(nèi)參基因的引物、探針、dNTPs等。
熱啟動(dòng)Taq酶混合物： 提供PCR擴(kuò)增動(dòng)力。
陽(yáng)性對(duì)照： 含有馬DNA片段的溶液，用于驗(yàn)證檢測(cè)流程有效性。
陰性對(duì)照： 無(wú)核酸酶水，用于確認(rèn)無(wú)污染。
（部分試劑盒可能提供）DNA提取試劑。
四、 操作流程簡(jiǎn)要步驟
樣本DNA提取。
配制反應(yīng)體系： 將預(yù)混液、酶、水混合后分裝到PCR管中。
加樣： 分別加入待測(cè)樣本DNA、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。
上機(jī)運(yùn)行： 設(shè)置好PCR循環(huán)程序（如：95°C預(yù)變性2分鐘；然后95°C 15秒，60°C 1分鐘，循環(huán)40次）。
結(jié)果分析： 儀器軟件自動(dòng)分析擴(kuò)增曲線和Ct值，操作人員根據(jù)內(nèi)標(biāo)情況和Ct值閾值進(jìn)行最終判讀。
五、 技術(shù)優(yōu)勢(shì)與特點(diǎn)
高特異性： 引物和探針經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)，只與馬的DNA序列結(jié)合，不與牛、豬、羊、雞等其他常見(jiàn)畜禽的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
高靈敏度： 可檢測(cè)出樣品中極微量的馬DNA（檢出限可達(dá)0.1%甚至更低），能有效識(shí)別輕微摻假。
雙重內(nèi)標(biāo)，結(jié)果可靠： 內(nèi)參基因的引入是質(zhì)量控制的核心，有效防止假陰性結(jié)果，確保報(bào)告的準(zhǔn)確性。
快速高效： 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程可在3小時(shí)內(nèi)完成，有利于快速響應(yīng)和市場(chǎng)監(jiān)管。
定性準(zhǔn)確： 結(jié)果明確為“檢出”或“未檢出”，客觀性強(qiáng)，易于解讀。
六、 重要注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)室防污染： 必須嚴(yán)格遵守PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)原則（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)），防止擴(kuò)增產(chǎn)物的氣溶膠污染，這是導(dǎo)致假陽(yáng)性的主要原因。
質(zhì)量控制： 每一次檢測(cè)都必須同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。只有對(duì)照結(jié)果完全符合預(yù)期，本次檢測(cè)的結(jié)果才可信。
DNA提取質(zhì)量： 加工食品中的DNA可能發(fā)生降解，或含有PCR抑制物（如鹽、脂肪、防腐劑），會(huì)影響檢測(cè)靈敏度。需要優(yōu)化提取方法。
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關(guān)鍵字： 馬源性成分;提取試劑盒;熒光PCR法;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物專注于實(shí)驗(yàn)室和公共衛(wèi)生領(lǐng)域，利用互聯(lián)網(wǎng)、數(shù)據(jù)分析及自動(dòng)化技術(shù)，包括實(shí)驗(yàn)室固定資產(chǎn)、儀器設(shè)備、生物樣本、化學(xué)品、試劑、配件耗材、環(huán)境、儀器自動(dòng)化和高通量篩選等一體化綜合管理平臺(tái)。不斷為各行業(yè)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞生命學(xué)產(chǎn)品、技術(shù)服務(wù)、免疫學(xué)和分子學(xué)產(chǎn)品，截止至2024年5月，西格生物已為生命科學(xué)、檢驗(yàn)檢測(cè)、化工材料、科研院所、政府機(jī)構(gòu)多行業(yè)300余家知名客戶提供實(shí)驗(yàn)室完整解決方案。本著幫助用戶實(shí)現(xiàn)“讓科研場(chǎng)所更智能、讓科研人員更專注、讓科學(xué)服務(wù)更高效“的愿景，西格生物將繼續(xù)在實(shí)驗(yàn)室科研產(chǎn)品領(lǐng)域持續(xù)發(fā)力，更加重視本土化，建構(gòu)通用性高、適應(yīng)性好、模塊搭配靈活，能快速響應(yīng)客戶需求的產(chǎn)品。