L Wnt-3A 小鼠成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
L Wnt-3A 小鼠成纖維細(xì)胞是由 L 細(xì)胞（小鼠成纖維細(xì)胞系 L929）經(jīng)基因改造后穩(wěn)定表達(dá) Wnt3A 蛋白的細(xì)胞系，主要用于分泌活性 Wnt3A 蛋白（用于條件培養(yǎng)基支持干細(xì)胞培養(yǎng)）和研究 Wnt/β-catenin 信號通路。
產(chǎn)品名稱 | L Wnt-3A 小鼠成纖維細(xì)胞 | 英文名稱 | LWnt3A:L Wnt-3A |
貨號 | AXB7176 | 生長特性 | 貼壁生長 |
基本特性
來源與背景：由 L929 小鼠成纖維細(xì)胞（或 L-M(TK-) 細(xì)胞）經(jīng) Wnt-3A 基因轉(zhuǎn)染構(gòu)建，穩(wěn)定分泌 Wnt3A 蛋白，用于干細(xì)胞培養(yǎng)和信號通路研究。
形態(tài)與生長：貼壁生長，
培養(yǎng)條件：
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：DMEM（高糖） + 10% 胎牛血清（FBS） + 1% 青霉素/鏈霉素（P/S）；需添加 G418（0.4 mg/mL）進(jìn)行篩選。
培養(yǎng)環(huán)境：37°C、5% CO?、95% 空氣。
凍存與復(fù)蘇：
凍存液：90% FBS + 10% DMSO（或無血清凍存液）；液氮儲存。
復(fù)蘇：37°C 水浴快速解凍，離心去除凍存液后接種于培養(yǎng)瓶。
培養(yǎng)操作流程
傳代（細(xì)胞密度達(dá) 80%-90% 時）：
棄培養(yǎng)上清，PBS 洗滌 1-2 次；加 0.25% 胰酶（含 EDTA）消化 1-2 分鐘（37°C），顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓后終止消化。
離心（1000 rpm，4 分鐘），棄上清，加培養(yǎng)基重懸；按 1:2 至 1:5 比例分瓶（或 1:3-1:4 傳代比例）。
換液：每 2-3 天更換新鮮培養(yǎng)基。
注意事項：
收到細(xì)胞后檢查包裝完整性及污染情況（細(xì)菌、真菌、支原體）；貼壁細(xì)胞可直接消化傳代，懸浮細(xì)胞需離心收集。
培養(yǎng)基需預(yù)熱（37°C），操作過程避免污染。
實驗應(yīng)用與關(guān)鍵特性
主要應(yīng)用：
制備 Wnt3A 條件培養(yǎng)基（用于維持胚胎干細(xì)胞或類器官的未分化狀態(tài)）。
研究 Wnt 信號通路、癌癥模型（如結(jié)直腸癌）及藥物篩選（如 Wnt 抑制劑）。
關(guān)鍵特性：
組成型分泌 Wnt3A 蛋白，需通過條件培養(yǎng)基收集活性蛋白。
生物安全等級 1，支原體檢測陰性（部分品牌）。
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC（CRL-2647）。
基本操作步驟：
原代培養(yǎng)：取材→分離→培養(yǎng)，需保持材料新鮮及嚴(yán)格無菌2。
傳代培養(yǎng)：貼壁細(xì)胞需胰酶消化，懸浮細(xì)胞可直接傳代，離心后重懸分瓶23。
凍存與復(fù)蘇：使用含10%DMSO的凍存液，程序降溫后液氮保存；復(fù)蘇時快速37℃水浴解凍。
具體特點如下：
環(huán)境與營養(yǎng)：需無菌環(huán)境、精確的溫度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），動物細(xì)胞常需血清，植物細(xì)胞需激素。
生長方式：貼壁細(xì)胞需表面附著，懸浮細(xì)胞自由漂浮，半貼壁半懸浮兼具兩者特性。
傳代與密度：貼壁細(xì)胞需胰酶消化傳代，懸浮細(xì)胞直接分瓶；密度達(dá)80%-90%時需傳代，避免營養(yǎng)枯竭與代謝抑制。
敏感性：對剪切應(yīng)力、污染、溫度變化敏感，需定期更換培養(yǎng)液清除代謝物。
應(yīng)用與局限：便于活細(xì)胞觀察與實驗控制，但體外環(huán)境與體內(nèi)存在差異，長期傳代可能導(dǎo)致遺傳不穩(wěn)定與去分化。
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注意事項與應(yīng)用：
無菌操作：必須嚴(yán)格無菌無毒，避免微生物污染和不同細(xì)胞間交叉污染。
營養(yǎng)需求：需提供氨基酸、維生素、無機(jī)鹽、促生長因子等，動物細(xì)胞還需血清。
抗生素使用：可添加雙抗或三抗預(yù)防污染，但長期培養(yǎng)不建議持續(xù)使用，以防產(chǎn)生耐藥性。
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究的基礎(chǔ)工具，可用于細(xì)胞生理代謝、藥物篩選、疫苗生產(chǎn)等研究。不同細(xì)胞系的具體培養(yǎng)條件需參考相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)嶒灲?jīng)驗調(diào)整。
關(guān)鍵字： L Wnt-3A; 小鼠成纖維細(xì)胞;貼壁細(xì)胞;
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