MDCKII細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
MDCK-II細(xì)胞是一種犬腎上皮樣貼壁細(xì)胞系，亞型來(lái)自Madin-Darby犬腎細(xì)胞，培養(yǎng)條件為含10%-20%胎牛血清的DMEM或MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，37℃、5%CO?飽和濕度環(huán)境；傳代推薦1:2至1:3比例，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%-90%時(shí)用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分鐘，終止離心后分瓶培養(yǎng)；凍存建議用含10%DMSO的血清凍存液程序降溫至-80℃后轉(zhuǎn)入液氮保存。
細(xì)胞基本說(shuō)明
產(chǎn)品名稱(chēng) | MDCKII細(xì)胞 | 英文名稱(chēng) | MDCKII:MDCK II |
貨號(hào) | AXB6442 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
來(lái)源與形態(tài)：MDCK-II細(xì)胞源于犬腎組織，細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)；部分亞型如MDCK-II/RFP帶紅色熒光標(biāo)記。
生長(zhǎng)特性：貼壁依賴(lài)性生長(zhǎng)，倍增時(shí)間約24-48小時(shí)，傳代周期通常為2-3天，每周換液2-3次；密集培養(yǎng)時(shí)可見(jiàn)巨大空泡，屬正常特性。
生物安全：生物安全等級(jí)為1級(jí)，支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)均為陰性，部分批次還通過(guò)HIV、乙型肝炎、丙型肝炎等病原體檢查。
培養(yǎng)條件與操作步驟
復(fù)蘇細(xì)胞
將凍存管在37℃水浴快速解凍（1-2分鐘），酒精消毒后轉(zhuǎn)移至離心管，加5-10mL預(yù)熱完全培養(yǎng)基混勻，1000rpm離心3-5分鐘，棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸，接種T25瓶（5-7mL/瓶），次日換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代
貼壁細(xì)胞：棄培養(yǎng)上清，用不含鈣鎂離子的PBS潤(rùn)洗1-2次；加1-2mL 0.25%胰酶-EDTA消化液，37℃孵育1-2分鐘，鏡下觀察細(xì)胞變圓并脫落，加5mL完全培養(yǎng)基終止消化，吹打均勻后1000rpm離心5分鐘，棄上清用新鮮培養(yǎng)基重懸，按1:2至1:6比例分瓶（如兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充5-8mL/瓶完全培養(yǎng)基。
懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞懸液，1000rpm離心5-10分鐘，棄上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液重懸，按1:2至1:5分瓶或采用半數(shù)換液法。
細(xì)胞凍存
細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，棄培養(yǎng)基，PBS清洗一次；加適量胰酶消化（細(xì)胞變圓脫落），加完全培養(yǎng)基終止消化，離心（1000rpm，4-10分鐘），棄上清；根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清凍存液（如含10%DMSO），調(diào)整細(xì)胞密度至1×10?-1×10?/mL，分裝凍存管，程序降溫（如-80℃過(guò)夜）后轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
注意事項(xiàng)與售后條款
運(yùn)輸處理：收到細(xì)胞后用75%酒精擦拭瓶身，超凈臺(tái)內(nèi)靜置2-4小時(shí)；若瓶蓋未松開(kāi)需擰松，鏡下檢查污染及脫落細(xì)胞，運(yùn)輸中脫落的活細(xì)胞可離心富集后傳代。
污染防控：嚴(yán)格無(wú)菌操作，若培養(yǎng)基渾濁或瓶身破損需立即聯(lián)系供應(yīng)商；售后條款通常要求48小時(shí)內(nèi)提交污染證據(jù)（如臺(tái)盼藍(lán)染色照片），核實(shí)后重發(fā)。
使用限制：細(xì)胞僅用于科研，未經(jīng)許可不得轉(zhuǎn)讓第三方；首次傳代建議1:2分瓶，2-3天換液一次。
基本操作步驟：
原代培養(yǎng)：取材→分離→培養(yǎng)，需保持材料新鮮及嚴(yán)格無(wú)菌2。
傳代培養(yǎng)：貼壁細(xì)胞需胰酶消化，懸浮細(xì)胞可直接傳代，離心后重懸分瓶23。
凍存與復(fù)蘇：使用含10%DMSO的凍存液，程序降溫后液氮保存；復(fù)蘇時(shí)快速37℃水浴解凍。
具體特點(diǎn)如下：
環(huán)境與營(yíng)養(yǎng)：需無(wú)菌環(huán)境、精確的溫度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），動(dòng)物細(xì)胞常需血清，植物細(xì)胞需激素。
生長(zhǎng)方式：貼壁細(xì)胞需表面附著，懸浮細(xì)胞自由漂浮，半貼壁半懸浮兼具兩者特性。
傳代與密度：貼壁細(xì)胞需胰酶消化傳代，懸浮細(xì)胞直接分瓶；密度達(dá)80%-90%時(shí)需傳代，避免營(yíng)養(yǎng)枯竭與代謝抑制。
敏感性：對(duì)剪切應(yīng)力、污染、溫度變化敏感，需定期更換培養(yǎng)液清除代謝物。
應(yīng)用與局限：便于活細(xì)胞觀察與實(shí)驗(yàn)控制，但體外環(huán)境與體內(nèi)存在差異，長(zhǎng)期傳代可能導(dǎo)致遺傳不穩(wěn)定與去分化。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Anti-GRM5/FITC 熒光素標(biāo)記代謝型谷氨酸受體5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh MRP5/ABCC5 多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格 0.1ml |
NR3B 英文名稱(chēng)： 谷酸受體3B抗體 0.2ml | RFX4 英文名稱(chēng)： 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體 0.2ml |
Anti-Urocortin 新型活性因子UCN抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | AQP3(aquaporin 3) 水通道蛋白-3抗原 0.5mg |
MAG-a/b (Myelin associated glycoprotein; L / S -MAG;) 髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg | phospho-Cortactin (Tyr466) 英文名稱(chēng)： 0酸化皮層肌動(dòng)蛋白抗體 0.1ml |
Anti-phospho-HDAC8(Ser39) 0酸化組蛋白去乙?；?抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml | NIPP1 英文名稱(chēng)： 核抑制蛋酸酶1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh RING1 環(huán)指蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-phospho-HDAC8(Ser39) 0酸化組蛋白去乙?；?抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser315) 0酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin K 組織蛋白酶K抗體 規(guī)格 0.1ml |
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CD8 大鼠CD8分子 |
Rhesus antibody Rh MT-ND6 NADH復(fù)合體6抗體 規(guī)格 0.1ml | MDCKII細(xì)胞THAA(Human thyroid hormone autoantibodies) ELISA Kit 人甲狀腺非肽激素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T |
Anti-PTP/PTPase/CD148 蛋白酪氨酸0酸酶CD148抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | CD177/NB1 peptide 嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗原 0.5mg |
注意事項(xiàng)與應(yīng)用：
無(wú)菌操作：必須嚴(yán)格無(wú)菌無(wú)毒，避免微生物污染和不同細(xì)胞間交叉污染。
營(yíng)養(yǎng)需求：需提供氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子等，動(dòng)物細(xì)胞還需血清。
抗生素使用：可添加雙抗或三抗預(yù)防污染，但長(zhǎng)期培養(yǎng)不建議持續(xù)使用，以防產(chǎn)生耐藥性。
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究的基礎(chǔ)工具，可用于細(xì)胞生理代謝、藥物篩選、疫苗生產(chǎn)等研究。不同細(xì)胞系的具體培養(yǎng)條件需參考相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn)調(diào)整。
關(guān)鍵字： MDCKII;貼壁細(xì)胞;
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、 華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。
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