線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測定試劑盒/分光光度法/24樣

測定意義：

復(fù)合體 Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱 NADH-CoQ  還原酶或 NADH 脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中最大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對電子從 NADH 傳遞給 CoQ ，同時可使 O2 還原生成 O2.- ，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生 O2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。

測定原理：

復(fù)合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+ ，在 340nm 下測定 NADH 的氧化速率計算出該酶活性的大小。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

測定步驟：

1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定

（1）工作液于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）孵育 5min。

（2）在 1mL 石英比色皿中加入 40μL 樣本、800μL 工作液和60μL 試劑六，立即混勻，記錄 340nm 處初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2 ，計算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。