轉(zhuǎn)氫酶-2測(cè)定試劑盒/微量法/96樣
測(cè)定意義：
TH 位于線粒體的內(nèi)膜上，又稱為線粒體復(fù)合體六，催化 NADH+NADP+和 NAD++NADPH 相互轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)線粒體 NAD(H)和 NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為 TH-2，催化 NADPH 和 NAD+生成 NADP+和 NADH。
測(cè)定原理：
NADH 和 NADPH 均在 340nm 有特征吸收，因此 TH 催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致 340nm 吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+ ）替代 NAD+ ，TH-2 催化 APAD+還原生成 APADH ， APADH 在 375nm 有特征光吸收，測(cè)定 375nm 光吸收的增加速率，來(lái)計(jì)算 TH-2 活性。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 375nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定
（1）工作液的配制：臨用前將試劑四、五轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解，置于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
（2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 20μL 樣本和 180 μL 工作液，混勻，立即記錄 375nm 處初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2 ，計(jì)算 ΔA=A2-A1。
注 意：
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
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