Na+k+ ——ATP酶測定試劑盒/微量法/48樣
測定意義：
Na+K+- ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細(xì)胞中，可催化 ATP 水解生成 ADP 和無機磷。
測定原理：
Na+K+-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及無機磷，通過測定無機磷的量來確定 ATP 酶活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
1 、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）。
| 對照管 | 測定管 |
試劑一 (μL） | 65 | 45 |
試劑二(μL） | 60 | 60 |
試劑三(μL） |
| 20 |
樣本 (μL） |
| 100 |
混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴 10min
混勻，8000g ，25℃離心 10min，取上清液
3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對照管 | 測定管 |
0.5μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液(μL） |
| 20 |
|
|
上清液(μL） |
|
| 20 | 20 |
蒸餾水(μL） | 20 |
|
|
|
定磷試劑(μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
混勻，室溫放置 30min，在 660nm 處，記錄各管吸光值。
注 意：
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒 100 管保證測 48 份 Na+K+-ATP 酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷。
3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
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