天冬酰胺酶(ASNase/asparaginase)活性測(cè)定試劑盒微板法/96樣
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
天冬酰胺酶( EC 3.5.1.1,ASNase)是一種酰胺水解酶,能夠?qū)? L-天冬酰胺脫去氨基生成L-天冬氨酸和氨。該酶具有抗腫瘤活性,在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛。
天冬酰胺酶(ASNase)催化天冬酰胺水解成天冬氨酸和氨,利用氨在強(qiáng)堿的環(huán)境下與次氯酸鹽和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚藍(lán),溶液顏色穩(wěn)定。其在 630nm 處有特征吸收峰,通過檢測(cè)氨增加的速率,即可計(jì)算該酶活性大小。試劑盒組成和配制:
試劑名稱
規(guī)格
保存要求
備注
提取液
液體100mL×1瓶
4°℃保存
試劑一
液體 20mL×1 瓶
試劑二
粉劑mg×2瓶
臨用前甩幾下使粉體落入底部,每瓶再加 11mL 蒸餾水溶解備用。
試劑三
液體20mL×1瓶
試劑四
液體12mL×1瓶
試劑五
液體 6mL×1 瓶
試劑六
A:液體 3.5mL×2 瓶
B:液體μL×1 支
4℃保存
臨用前取30μL的B液進(jìn)一瓶A 液中,混勻后作為試劑六使用?;靹蚝蟮脑噭┝恢軆?nèi)用完。
標(biāo)準(zhǔn)管
液體 mL×1 支
若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑
所需的儀器和用品:酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和蒸餾水。
天冬酰胺酶(ASNase)活性測(cè)定:樣本制備:① 組織樣本:稱取約 0.1g 組織(水分足的樣本可取 0.2-0.5g),加入1mL提取液;進(jìn)行冰浴勻漿。12000rpm,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 [注]:也可以按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例提取。
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
[注]:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)
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