支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT)活性測定試劑盒微板法/48樣
產(chǎn)品簡介：
支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT,E.C.2.6.1.42) 屬于以磷酸吡哆醛作為輔酶的IV類轉(zhuǎn)氨酶。該酶分 布十分廣泛，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)廣泛存在于原核生物和大多數(shù)真核生物中。
支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT催化特異 L-型氨基酸氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成相應的支鏈α- 酮酸和谷氨酸；再用特異作用于谷氨酸的酶復合體分解谷氨酸，同時與顯色劑反應生成黃色 物質(zhì)，該物質(zhì)在450nm 處有大吸收峰，進而得到支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT) 的酶活性大小。 該酶催化反應：L-leucine+2-oxoglutarate=4-methyl-2-oxopentanoate+L-glutamate。
試劑盒組成和配制：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存要求 | 備注 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑一 | 粉 劑 m g × 1 支 | 4°℃保存 | 用前甩幾下或4℃離心使試劑落入試管底部，再加2.2mL的蒸餾水充分溶解，仍4℃保存。 |
試劑二 | 粉劑mg×1支 | 4℃保存 | 用前甩幾下或4℃離心使試劑落入試管底部，再加1.2mL蒸餾水溶解備用。仍4℃保存。 |
試劑三 | 粉劑mg×1支 | 4°℃保存 | 用前甩幾下或4℃離心使試劑落入試管底部，再加1.1mL蒸餾水溶解備用。仍4℃保存。 |
試劑四 | 液體20mL×1瓶 | 4°℃保存 |
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試劑五 | 液體2mL×1支 | 4°℃保存 |
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試劑六 | 粉劑mg×1支 | -20℃保存 | 用前甩幾下或4℃離心使試劑落入試管底部，再加1.1mL蒸餾水溶解備用。仍-20℃保存。 |
試劑七 | 液體1mL×1支 | 4℃保存 |
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標準品 | 液體mL×1支 | 4°℃保存 |
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所需的儀器和用品：
酶標儀、96 孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT)酶活性檢測:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！
樣本制備：
① 組織樣本：
稱取約0. 1g 組織(水分多的樣本取0.5g), 加 入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。12000rpm, 4℃離心10min, 取上清，置冰上待測。
[注]: 若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)為1:5~10的比例提取。
②細菌/細胞樣本：
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取500萬細菌或細胞加入1mL 提取液；超聲波破碎細菌或細胞(冰浴，300W, 超 聲 3s, 間 隔 7s, 總 時 間 3min);12000rpm, 4℃離心10min, 取上清，置冰上待測。
[注]: 若增加樣本量，按照細菌/細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL) 為500~1000:1 的比 例進行提取。
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