產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱 | MDA-MB-231-EGFP-LUC;人三陰性乳腺癌綠色熒光蛋白-熒光素酶標記 | 英文名稱 | MDA-MB-231-EGFP-LUC：MDAMB231EGFPLUC |
貨號 | AXB10520 | 生長特性 | 貼壁生長 |
用途 | 僅用于科研 實驗 | 種屬 | 人 |
源自人三陰性乳腺癌（TNBC）細胞系MDA-MB-231，通過慢病毒轉導穩(wěn)定表達增強型綠色熒光蛋白（EGFP）和螢火蟲熒光素酶（LUC）。
三陰性特征：缺乏雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和HER2表達，具有高侵襲性和轉移潛能。
遺傳突變：攜帶TP53-R280K和KRAS-G13D等致癌突變，CD44?/CD21?干細胞表型。
標記功能
EGFP標記：用于活細胞成像及流式分選（激發(fā)波長488 nm）。
LUC標記：支持活體生物發(fā)光成像（BLI）及定量檢測（需添加底物D-luciferin）。
應用場景：腫瘤轉移機制、藥物篩選及原位/皮下移植瘤模型構建。
二、培養(yǎng)操作流程
培養(yǎng)基與試劑
成分 要求
基礎培養(yǎng)基 DMEM高糖培養(yǎng)基（含4.5 g/L葡萄糖）或Leibovitz's L-15
血清添加 10%胎牛血清（FBS）
雙抗 1%青霉素-鏈霉素（可選）
消化液 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA
特殊要求 L-15培養(yǎng)基需在無CO?環(huán)境中使用
傳代培養(yǎng)（貼壁細胞）
消化：棄舊液，PBS潤洗后加胰酶（T25瓶用1 mL），37℃消化1-2分鐘，鏡下觀察細胞變圓即終止。
終止與離心：加完全培養(yǎng)基終止，1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
重懸與接種：用新鮮培養(yǎng)基重懸，按 1:2至1:4比例 分瓶（T25瓶補液6-8 mL）。
凍存與復蘇
凍存液：90%完全培養(yǎng)基 + 10% DMSO（液氮保存）。
復蘇：37℃水浴快速解凍，離心（1000 rpm，5分鐘）后重懸接種。
三、特殊注意事項
CO?環(huán)境敏感性
若使用L-15培養(yǎng)基，需將培養(yǎng)箱CO?濃度調(diào)至0%（空氣培養(yǎng)），否則酸化導致細胞毒性。
替代方案：使用DMEM培養(yǎng)基并在5% CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
熒光維持
長期培養(yǎng)需定期檢測EGFP表達（每10代），避免標記丟失。
細胞狀態(tài)監(jiān)控
出現(xiàn)黑色顆粒或漂浮細胞屬正?，F(xiàn)象，但若比例＞20%需優(yōu)化培養(yǎng)條件。
科研應用：
腫瘤轉移研究：尾靜脈注射裸鼠構建肺轉移模型（3×10?細胞/鼠）。
藥物篩選：靶向EMT（上皮-間質(zhì)轉化）或干細胞通路的化合物評估。
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關鍵字： MDA-MB-231-EGFP-LUC;人三陰性乳腺癌綠色熒光蛋白-熒光素酶標記;貼壁細胞;
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