產品介紹：

試劑盒采用雙抗體夾心法。將捕獲抗體包被在微孔板上，加入標準品或樣本后，再加入HRP標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-抗體復合物。加入底物TMB顯色，顏色深淺與維生素D濃度正相關，通過酶標儀測定吸光度，計算樣本濃度。

試劑盒組成

預包被抗體的酶標板：96孔或48孔配置。

標準品：不同濃度梯度，用于繪制標準曲線。

樣本稀釋液：用于稀釋待測樣本。

檢測抗體-HRP：辣根過氧化物酶標記的檢測抗體。

洗滌緩沖液：用于洗滌反應孔。

底物A和B：顯色底物，與HRP反應顯色。

終止液：終止顯色反應。

封板膜：用于封閉反應孔。

說明書：提供詳細操作步驟。

檢測范圍與靈敏度

檢測范圍：通常為125-8000 pg/mL。

靈敏度：最低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

樣本類型

血清：使用不含熱原和內毒素的試管，收集血液后離心分離。

血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心取上清。

細胞上清液：離心去除顆粒和聚合物。

組織勻漿：組織加入生理鹽水搗碎，離心取上清。

操作步驟

準備試劑和標準品：試劑盒平衡至室溫，濃縮洗滌液溶解結晶。

設置孔板：空白孔、標準品孔和樣本孔。

加樣：加入標準品、樣本和檢測抗體，溫育。

洗滌：徹底洗滌孔板，去除未結合成分。

顯色：加入底物溶液，避光孵育。

終止：加入終止液，顏色變化停止。

測定：酶標儀測定吸光度，計算濃度。

性能特點

靈敏度：可檢測低濃度維生素D。

特異性：不與其他類似結構蛋白交叉反應。

重復性：板內和板間變異系數(shù)均小于15%。

貯藏：2-8℃避光防潮保存，有效期6個月。

注意事項

樣本處理：避免溶血、高血脂樣本，標本需離心去除懸浮物。

試劑準備：試劑需恢復至室溫，按說明書稀釋和配制。

洗滌關鍵：洗滌不充分會導致OD值升高，需徹底洗滌。

顯色控制：顯色時間需根據(jù)實際情況調整，避免過度顯色。

主要優(yōu)點缺點

維度  優(yōu)勢 (Pros) 劣勢 (Cons)

檢測性能   靈敏度極高，特異性強，結果準確  可能存在交叉反應，易受干擾物影響

操作體驗   流程標準化，無需昂貴設備，適合高通量檢測   步驟多且繁瑣，耗時較長，對操作技巧有要求

經濟成本   適合大批量樣本檢測，長期看性價比尚可   單次試劑成本較高，且不同批次可能存在差異

應用范圍   可檢測血清、血漿、細胞上清等多種樣本   對樣本質量（如是否溶血）敏感

公司正在出售的產品：

試劑與樣本準備階段

溫度平衡（最容易被忽視的點）

 操作： 從冰箱取出的試劑盒（包括標準品、酶標試劑、樣品等）必須在室溫（18-25℃）下平衡 30 分鐘。

后果： 冷試劑直接使用會導致孔內溫差，產生冷凝水或非特異性背景，嚴重影響 OD 值。

試劑配制

洗滌液： 濃縮洗滌液如果在低溫下保存可能會有結晶析出。配制時必須確保結晶完全溶解并混勻。

現(xiàn)用現(xiàn)配： 酶標試劑和顯色液（如 TMB）對光和熱敏感，建議在使用前配制工作液，避免失效。

樣本處理

避免溶血： 血清樣本如果發(fā)生溶血（紅細胞破裂），會釋放過氧化物酶，導致假陽性或背景過高。

離心去雜質： 血液或細胞上清樣本在加樣前最好進行離心，去除沉淀和懸浮物，防止堵塞孔底或干擾讀數(shù)。

稀釋倍數(shù)： 如果樣本濃度過高，超出標準曲線范圍，必須進行預實驗確定稀釋倍數(shù)。計算結果時記得乘以稀釋倍數(shù)。