產(chǎn)品原理
基于實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，采用TaqMan探針法：
探針設(shè)計：5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團。擴增時Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探針，釋放熒光信號，通過熒光強度變化定量檢測靶序列。
檢測流程：
反轉(zhuǎn)錄：將RNA模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。
擴增與檢測：40個循環(huán)的PCR反應(yīng)（94℃預(yù)變性→60℃退火/延伸），實時采集FAM通道熒光信號。
產(chǎn)品名稱 | 香櫞探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Fructus Citri Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4938 |
產(chǎn)品特點
高靈敏度與特異性：引物/探針針對香櫞保守區(qū)設(shè)計，避免交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液、酶混合液及引物探針，僅需提供樣品RNA。
雙用途：支持定性與定量分析，線性范圍達5個數(shù)量級（101-107拷貝/μL）。
質(zhì)控完善：含陽性對照（無傳染性DNA片段）及陰性對照。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| 酶混合液 | 100μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL |
| 引物混合液 | 100μL |
| TaqMan探針 | 50μL |
| 陽性對照（1×108拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
操作步驟
1. 標準曲線制備
用陽性對照進行10倍梯度稀釋（107-102拷貝/μL），獨立操作避免污染。
2. RNA提取
建議設(shè)置N+2樣本（含陽性/陰性對照），兼容柱式提取法或免提取試劑。
3. qRT-PCR反應(yīng)體系
| 組分 | 樣品管（μL） | 陰性對照（μL） | 標準曲線管（μL） |
| 緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探針 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 樣品RNA/標準品 | 5 | - | 5（對應(yīng)梯度） |
| 超純水 | - | 5 | - |
反應(yīng)程序：
50℃ 30 min（反轉(zhuǎn)錄）→ 94℃ 10 min（預(yù)變性）→ 40循環(huán)（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集熒光）。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣品濃度。
定性檢測：
陽性：Ct≤35，擴增曲線明顯；陰性：Ct≥40。
灰區(qū)（35<Ct<40）：需復(fù)測確認。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行。
防污染：使用帶濾芯槍頭，定期用75%乙醇或紫外消毒臺面。
儲存：試劑避光保存，避免反復(fù)凍融。
質(zhì)控要求：陰性對照Ct≥40，陽性對照Ct≤30或≤36。
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關(guān)鍵字： 香櫞;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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