產(chǎn)品用途
專用于仙鶴草核酸的定性或定量檢測，適用于科研用途，不可用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 | 仙鶴草探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Herba Agrimoniae Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4943 |
檢測原理
基于TaqMan探針法實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)：
特異性引物與探針：針對仙鶴草基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)，探針5'端標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)，3'端含淬滅基團(tuán)（如NFQ）。
信號釋放：PCR擴(kuò)增時，Taq酶切割探針，分離熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)，釋放熒光信號，通過儀器實(shí)時監(jiān)測定量。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/功能說明 |
| qPCR緩沖液 | 500μL（提供反應(yīng)基礎(chǔ)環(huán)境） |
| 酶混合液 | 50-100μL（含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶等） |
| 熒光模板稀釋液 | 1mL（用于標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋） |
| 引物-探針干粉/混合液| 50T（特異性擴(kuò)增仙鶴草靶序列） |
| 陽性對照 | 50μL（10^7-10^8拷貝/μL人工DNA片段） |
| 陰性對照 | 50μL（無核酸酶水） |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測需6個梯度稀釋）
陽性對照依次10倍稀釋（10^1-10^6拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
2. 樣本處理
DNA提取：推薦使用商品化提取試劑盒，設(shè)置陰性/陽性對照。
保存：短期-20℃，長期-70℃，避免反復(fù)凍融。
3. qPCR反應(yīng)體系（20μL）
| 組分 | 體積 |
| qPCR緩沖液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物-探針混合液 | 2μL |
| 模板DNA/標(biāo)準(zhǔn)品 | 5μL |
4. 擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 熒光采集 |
| 逆轉(zhuǎn)錄（若需） | 50℃ | 10-30min | 否 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10min | 否 |
| 擴(kuò)增（40循環(huán)） | 95℃ | 15sec | 否 |
| | 55-60℃ | 30-60sec | FAM通道 |
結(jié)果判讀
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct≤35（擴(kuò)增曲線明顯）；
陰性：Ct≥40；
灰區(qū)（35<Ct<40）：需復(fù)測確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需分區(qū)域進(jìn)行，防止污染。
質(zhì)量控制：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽性對照。
局限性：
基因突變可能導(dǎo)致假陰性；
交叉污染或運(yùn)輸不當(dāng)可能影響結(jié)果準(zhǔn)確性。
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關(guān)鍵字： 仙鶴草;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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