技術(shù)原理

基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，通過(guò)探針?lè)▽?shí)現(xiàn)高特異性檢測(cè)：

探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，靶序列擴(kuò)增時(shí)Taq酶切割探針，釋放熒光信號(hào)。

定量分析：通過(guò)熒光強(qiáng)度增長(zhǎng)與Ct值，計(jì)算起始模板濃度。

反轉(zhuǎn)錄步驟（若含RT）：將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行擴(kuò)增。

產(chǎn)品組成

| 成分 | 規(guī)格/功能 |

| qRT-PCR緩沖液 | 500μL（提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境） |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等） |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL（用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)稀釋?zhuān)?|

| 引物混合液 | 100μL（山藥特異性引物） |

| qRT-PCR探針 | 50μL（標(biāo)記FAM熒光） |

| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL） | 50μL（無(wú)傳染性DNA片段） |

| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備（6個(gè)10倍梯度稀釋?zhuān)?02~10?拷貝/μL）：

使用專(zhuān)用稀釋液分步稀釋陽(yáng)性對(duì)照，獨(dú)立操作避免污染。

2. 樣本RNA提?。?/span>

推薦配套RNA提取試劑盒，或兼容的其他品牌試劑。

3. qRT-PCR反應(yīng)體系（20μL）：

| 成分 | 體積（μL） |

| qRT-PCR緩沖液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探針 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 反應(yīng)程序：

逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30 min（若含RT步驟）；

預(yù)變性：94℃ 10 min；

擴(kuò)增（40循環(huán)）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號(hào)）。

數(shù)據(jù)分析

定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。

定性檢測(cè)：

陽(yáng)性：Ct ≤ 35，典型擴(kuò)增曲線(xiàn)；

陰性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需復(fù)測(cè)確認(rèn)。

注意事項(xiàng)

操作分區(qū)進(jìn)行，避免交叉污染。

陽(yáng)性對(duì)照需最后加入，防止氣溶膠擴(kuò)散。

僅限科研使用，不可用于臨床診斷。

避免反復(fù)凍融試劑，影響穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品