海藻探針法PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 海藻探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Sargassum Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5103 |
檢測原理
基于實時熒光定量PCR（qPCR）技術，采用探針法原理：
探針設計：5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團，通過Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號。
定量分析：通過監(jiān)測擴增過程中熒光信號的增長，實現(xiàn)對靶標RNA的定量和定性檢測。
三步流程：
反轉錄：將RNA模板逆轉錄為cDNA。
擴增：特異性引物與探針結合靶序列進行PCR擴增。
檢測：實時采集熒光信號（FAM通道）。
產品特點
高靈敏度：檢測限低至100拷貝/反應。
高特異性：引物針對海藻保守序列設計，避免交叉反應。
即開即用：預混緩沖液、酶及引物探針，僅需提供樣品RNA。
內置對照：含陽性對照（1×10?拷貝/μL），便于排除假陰性。
適用范圍：僅限科研用途，不可用于臨床診斷。
試劑盒組成
| 編號 | 成分 | 規(guī)格 |
| 試劑一 | 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| 試劑二 | 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 試劑三 | 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL |
| 試劑四 | 海藻探針法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 試劑五 | 海藻qRT-PCR探針 | 50μL |
| 試劑六 | 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
實驗步驟
1. 標準曲線制備（102~10?拷貝/μL梯度稀釋）
使用陽性對照按10倍梯度稀釋，獨立操作避免污染。
2. RNA提取
建議設置陰性對照（NC）和陽性對照（PC），推薦使用柱式RNA提取試劑盒。
3. qRT-PCR反應體系（20μL）
| 成分 | 樣品管 | 陰性對照 | 標準曲線管 |
| 緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探針 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| RNA模板 | 5μL | - | - |
| 超純水 | - | 5μL | - |
| 標準品 | - | - | 5μL |
4. 反應程序
逆轉錄：50℃ 30分鐘
預變性：94℃ 10分鐘
擴增（40循環(huán)）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集熒光信號）
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計算樣品濃度。
定性檢測：
陰性對照Ct≥40，陽性對照Ct≤30。
樣品Ct≤35為陽性，≥40為陰性；35<Ct<40需復測。
注意事項
操作分區(qū)進行，避免氣溶膠污染。
探針避光保存，避免反復凍融。
本產品嚴禁用于臨床診斷。
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關鍵字： 海藻;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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