產(chǎn)品原理

基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，采用TaqMan探針?lè)ǎ?/span>

探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，探針與靶序列結(jié)合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)。

定量分析：通過(guò)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中熒光強(qiáng)度的實(shí)時(shí)變化，計(jì)算Ct值，實(shí)現(xiàn)對(duì)青果RNA/DNA的定性與定量檢測(cè)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

高靈敏度：可檢測(cè)低至幾百拷貝/反應(yīng)的靶序列。

高特異性：引物及探針針對(duì)青果保守區(qū)域設(shè)計(jì)，避免交叉反應(yīng)。

便捷性：預(yù)混試劑即開即用，僅需提供樣品RNA/DNA模板。

質(zhì)控保障：含陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL）和陰性對(duì)照，確保結(jié)果可靠性。

試劑盒組成

| 成分 | 規(guī)格/含量 |

| 探針?lè)╭RT-PCR緩沖液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL |

| 青果引物混合液 | 100μL |

| 青果探針 | 50μL |

| 陽(yáng)性對(duì)照 | 50μL（1×10^8拷貝/μL） |

| 說(shuō)明書 | 1份 |

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10^2~10^7拷貝/μL梯度稀釋）

使用專用稀釋液按10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照，分裝后冰上保存。

2. 樣品制備

RNA提?。和扑]使用柱式病毒RNA提取試劑盒，設(shè)置陰性/陽(yáng)性對(duì)照（N+2原則）。

DNA提?。杭嫒莩Ｒ?guī)提取方法，避免交叉污染。

3. qPCR反應(yīng)體系（20μL）

| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對(duì)照（μL） | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管（μL） |

| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探針 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 樣品RNA/DNA | 5 | - | - |

| 標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋液 | - | - | 5 |

| 超純水 | - | 5 | - |

4. 反應(yīng)程序

| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |

| 逆轉(zhuǎn)錄（僅RNA） | 50℃ | 30 min |

| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |

| 擴(kuò)增（40循環(huán)） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集熒光） |

數(shù)據(jù)分析

定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣品濃度。

定性判定：

陽(yáng)性：Ct≤35，擴(kuò)增曲線呈指數(shù)增長(zhǎng)。

陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增。

可疑（35<Ct<40）：需重復(fù)檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

防污染：實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），使用帶濾芯槍頭。

試劑保存：避免反復(fù)凍融，解凍后需充分混勻并離心。

質(zhì)控要求：

陰性對(duì)照：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增。

陽(yáng)性對(duì)照：Ct≤30且曲線典型。

禁用范圍：本產(chǎn)品僅限科研使用，嚴(yán)禁用于臨床診斷。

公司正在出售的產(chǎn)品