產(chǎn)品原理

本試劑盒基于實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，采用探針法檢測女貞子特異性核酸序列。探針5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團。當Taq酶在擴增過程中切割探針時，報告基團與淬滅基團分離，釋放熒光信號，通過實時監(jiān)測熒光強度實現(xiàn)靶序列的定性與定量分析。

產(chǎn)品組成

| 成分 | 規(guī)格 | 功能說明 |

| qRT-PCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶及Taq DNA聚合酶 |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL | 標準品稀釋及陰性對照 |

| 女貞子引物混合液 | 100μL | 特異性擴增靶序列 |

| 女貞子熒光探針 | 50μL | 靶序列檢測與信號釋放 |

| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL | 標準曲線制備及質(zhì)控 |

| 說明書 | 1份 | 操作流程及數(shù)據(jù)分析 |

操作步驟

1. 標準曲線制備

標記6管，依次稀釋陽性對照（10?–102拷貝/μL梯度），每步用45μL稀釋液與5μL上一步產(chǎn)物混合，震蕩后冰上保存。

2. 樣品RNA提取

建議設(shè)置N+2樣本（含陽性/陰性對照），采用兼容的RNA提取試劑純化模板。

3. qRT-PCR反應(yīng)體系（20μL）

| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對照（μL） | 標準曲線管（μL） |

| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探針 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板/水/標準品 | 5 | 5（水） | 5（梯度標準品） |

4. 反應(yīng)程序

| 步驟 | 溫度 | 時間 |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |

| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |

| 擴增（40循環(huán)） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信號） |

數(shù)據(jù)分析

定量檢測：以標準曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計算樣本濃度。

定性判定：

陽性：Ct≤35，典型擴增曲線；

陰性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需復(fù)測確認。

注意事項

僅限科研使用，不可用于臨床診斷。

操作需在獨立區(qū)域進行，避免交叉污染。

保存條件：-20℃避光，避免反復(fù)凍融。

陽性對照為無傳染性DNA片段，無需生物安全顧慮。

公司正在出售的產(chǎn)品