產(chǎn)品概述
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（探針法）技術(shù)，專用于木蝴蝶（Semen oroxyli）的快速、高特異性核酸鑒定。通過靶向木蝴蝶高度保守基因區(qū)域設(shè)計(jì)的引物與探針，結(jié)合Taq酶的5'核酸外切酶活性，實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增過程的實(shí)時(shí)熒光信號(hào)檢測(cè)，適用于科研場(chǎng)景下的物種鑒定及RNA定量分析。
產(chǎn)品名稱 | 木蝴蝶探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Semen Oroxyli Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR5029 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度與特異性：優(yōu)化引物及探針僅靶向木蝴蝶基因，避免與其他物種交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液與酶體系，用戶僅需提供RNA模板。
內(nèi)置對(duì)照：含陽性對(duì)照（1×10?拷貝/μL），便于區(qū)分假陰性結(jié)果。
兼容性：適配多數(shù)病毒RNA提取試劑盒，支持20μL或40μL反應(yīng)體系（視規(guī)格而定）。
適用范圍：僅供科研使用，不可用于臨床診斷。
規(guī)格與成分
| 成分 | 規(guī)格/含量 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| 木蝴蝶引物混合液 | 100 μL |
| 木蝴蝶探針 | 50 μL |
| 陽性對(duì)照（1×10?拷貝/μL） | 50 μL |
| 使用說明書 | 1份 |
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)流程
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（以102-10?拷貝/μL梯度為例）
標(biāo)記6管稀釋液，依次加入陽性對(duì)照進(jìn)行10倍梯度稀釋（需獨(dú)立操作區(qū)）。
冰上暫存稀釋后標(biāo)準(zhǔn)品。
RNA提取
建議設(shè)置陰性/陽性提取對(duì)照（水或陽性對(duì)照稀釋液）。
自備RNA提取試劑，或兼容柱式提取法。
qRT-PCR反應(yīng)（20μL體系示例）
| 組分 | 樣品管 | 陰性對(duì)照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管 |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 探針 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| RNA模板/標(biāo)準(zhǔn)品/水 | 5 μL | 5 μL水 | 5 μL標(biāo)準(zhǔn)品 |
反應(yīng)程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30 min
預(yù)變性：94℃ 10 min
40循環(huán)：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信號(hào)）
數(shù)據(jù)分析
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性判定：
陽性：Ct ≤ 35，擴(kuò)增曲線典型；
陰性：Ct ≥ 40；
可疑（35<Ct<40）：需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
操作需分區(qū)（試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增區(qū)），避免污染。
陽性對(duì)照需最后加入，防止氣溶膠污染。
實(shí)驗(yàn)廢棄物需按生物危害品處理。
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關(guān)鍵字： 木蝴蝶;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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