操作要點：
電泳條件?：使用15% SDS-PAGE凝膠，以提高對小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。
?轉(zhuǎn)膜參數(shù)?：采用濕轉(zhuǎn)法，100 V、60–90分鐘（4°C），使用PVDF膜（需甲醇預(yù)活化）。
?抗體選擇?：
一抗：抗CST3多克隆抗體（如兔源抗體），推薦稀釋比為1:1000。
二抗：HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG，稀釋比1:10,000。
?顯色方式?：ECL化學(xué)發(fā)光法，預(yù)期條帶位于?~13.4 kDa?處。
?內(nèi)參建議?：由于CST3分子量較小，可選用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作為內(nèi)參，避免條帶重疊。
產(chǎn)品概述：
Recombinant Human NCBP2（人核帽結(jié)合蛋白亞基2重組蛋白）是一種在大腸桿菌中表達(dá)的高純度重組蛋白，作為核帽結(jié)合復(fù)合物（CBC）的核心組分，通過識別mRNA 5'端帽子結(jié)構(gòu)，在pre-mRNA剪接、核輸出及質(zhì)量監(jiān)控等基因表達(dá)調(diào)控環(huán)節(jié)發(fā)揮關(guān)鍵作用。
產(chǎn)品名稱; Recombinant Human NCBP2
別名; 20 kDa nuclear cap binding protein, CBC2, CBP20, Cell proliferation inducing gene 55 protein, NCBP 2, NCBP 20 kDa subunit, NCBP interacting protein 1, NIP1, Nuclear cap binding protein subunit 2, PIG55
宿主; E.Coli
表達(dá)區(qū)間; 1-156
分子量; 17.1 kDa
標(biāo)簽; N-terminal His Tag
純度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
應(yīng)用; Western Blot, ELISA
性狀; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
使用說明：
復(fù)溶方法?: 使用無菌蒸餾水或PBS緩沖液（pH 7.4）溶解凍干粉，輕輕混勻至完全溶解。
?應(yīng)用建議?:
?實驗用途?: 適用于Western Blot、ELISA等檢測，作為抗原或標(biāo)準(zhǔn)品。
?濃度調(diào)整?: 根據(jù)實驗需求稀釋，避免高濃度導(dǎo)致非特異性結(jié)合。
?安全提示?: 操作時需佩戴手套和護(hù)目鏡，遵循實驗室生物安全規(guī)范。
重組表達(dá)原理：
基因克隆?：從牛基因組中獲取CST3基因的編碼序列（對應(yīng)氨基酸31–148），插入含有啟動子、篩選標(biāo)記和His標(biāo)簽序列的質(zhì)粒載體。
?宿主表達(dá)?：將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E. coli（如BL21菌株），在IPTG誘導(dǎo)下啟動蛋白表達(dá)。該系統(tǒng)成本低、表達(dá)效率高，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
?蛋白純化?：利用His標(biāo)簽與鎳柱親和層析結(jié)合，實現(xiàn)高純度（>95%）蛋白回收，再經(jīng)透析或凝膠過濾去除雜質(zhì)。
?凍干保存?：加入海藻糖作為保護(hù)劑，凍干后可長期穩(wěn)定儲存，復(fù)溶后保持天然構(gòu)象和生物活性。
公司正在出售的產(chǎn)品：
桿菌PirA抗體 | PWWP域包含蛋白1抗體 |
轉(zhuǎn)錄延伸因子結(jié)合蛋白1抗體 | 純化微粒體磷脂酶D1（Phospholipase D1）活性比色法定量檢測試劑盒 |
推定NFκB激活蛋白20抗體 | 細(xì)胞低密度脂蛋白（LDL-Cholesterol）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 |
Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 | CDK3蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 |
細(xì)胞游離毛地黃皂苷法（DIGITONIN）高氯酸萘醌 | 石蠟切片組織HISTONE H3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 |
體液HCV（HEPATITIS VIRUS C）病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒 | 飲料精（arginine）含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒 |
組織甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性比色法 | 腦特異性血管生成抑制蛋白2抗體 |
水中氯元素（Chlorine）比色法定量檢測試劑盒 | 凋亡相關(guān)蛋白2抗體 |
電泳分析試劑盒（MMP2/9） | 乙醇脫氫酶1抗體 |
高質(zhì)型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試劑盒 | APC-Cy7標(biāo)記小鼠CD45R單克隆抗體 |
AF750標(biāo)記的微管蛋白抗體 | 磷酸化P21蛋白激活的蛋白激酶6 |
人體NK細(xì)胞完全培養(yǎng)液 | Recombinant Human NCBP2γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16抗體 |
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體 | ITPRIPL1蛋白抗體 |
重組蛋白生產(chǎn)流程：
通常包括以下幾個核心步驟：
基因克隆：首先，科學(xué)家需要獲取編碼目標(biāo)蛋白的特定基因序列（目的基因）。
構(gòu)建載體：將目的基因插入到一個被稱為“載體”的DNA分子中，這個載體就像是一個運輸工具，
能將目的基因送入宿主細(xì)胞并指導(dǎo)其表達(dá)。
轉(zhuǎn)入宿主：將構(gòu)建好的重組載體導(dǎo)入選定的宿主細(xì)胞中，這個過程稱為“轉(zhuǎn)化”或“轉(zhuǎn)染”。
表達(dá)與培養(yǎng)：宿主細(xì)胞在適宜的條件下進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，其自身的遺傳系統(tǒng)會讀取重組載體上的基因信息，開始大量生產(chǎn)目標(biāo)蛋白。
純化：通過一系列復(fù)雜的生物化學(xué)方法（如層析技術(shù)），將目標(biāo)重組蛋白從宿主細(xì)胞的眾多混合物中分離出來，以獲得高純度的產(chǎn)品。
關(guān)鍵字： NCBP2;17.1 kDa; 1-156;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物專注于實驗室和公共衛(wèi)生領(lǐng)域，利用互聯(lián)網(wǎng)、數(shù)據(jù)分析及自動化技術(shù)，包括實驗室固定資產(chǎn)、儀器設(shè)備、生物樣本、化學(xué)品、試劑、配件耗材、環(huán)境、儀器自動化和高通量篩選等一體化綜合管理平臺。不斷為各行業(yè)實驗室細(xì)胞生命學(xué)產(chǎn)品、技術(shù)服務(wù)、免疫學(xué)和分子學(xué)產(chǎn)品，截止至2024年5月，西格生物已為生命科學(xué)、檢驗檢測、化工材料、科研院所、政府機(jī)構(gòu)多行業(yè)300余家知名客戶提供實驗室完整解決方案。本著幫助用戶實現(xiàn)“讓科研場所更智能、讓科研人員更專注、讓科學(xué)服務(wù)更高效“的愿景，西格生物將繼續(xù)在實驗室科研產(chǎn)品領(lǐng)域持續(xù)發(fā)力，更加重視本土化，建構(gòu)通用性高、適應(yīng)性好、模塊搭配靈活，能快速響應(yīng)客戶需求的產(chǎn)品。