產(chǎn)品基本信息
規(guī)格：50次/盒（20μL反應(yīng)體系）
適用樣本：DNA模板（需用戶自備）
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
用途：科研用途，適用于地龍（Pheretima）的定性或熒光定量PCR檢測。
產(chǎn)品名稱 | 地龍?zhí)结樂?/span>PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Pheretima Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR5139 |
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 | 功能 |
| 探針法qPCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |
| 探針法qPCR酶混合液 | 50μL | 含Taq酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等 |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1mL | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋及陰性對照 |
| PCR引物-探針干粉 | 50T | 特異性擴(kuò)增地龍DNA靶序列 |
| PCR陽性對照（10^7拷貝/μL） | 50μL | 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及質(zhì)控 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測需執(zhí)行）
用陽性對照按10倍梯度稀釋（10^1–10^6拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
標(biāo)記離心管（6–1號(hào)），依次加入稀釋液和陽性對照，渦旋混勻后冰上保存。
2. 樣本DNA提取
建議設(shè)置陰性對照（NC）和陽性對照（PC），提取方法需兼容常規(guī)DNA試劑盒。
3. qPCR反應(yīng)體系（20μL）
| 組分 | 樣品管 | 陰性對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管 |
| qPCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探針 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 樣本DNA/標(biāo)準(zhǔn)品 | 5μL | - | 5μL |
| 超純水 | - | 5μL | - |
4. 擴(kuò)增程序
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘（若含RNA步驟）；
預(yù)變性：94℃ 10分鐘；
40循環(huán)：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集FAM通道信號(hào)）。
結(jié)果分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測：
陽性：Ct≤36，且有典型擴(kuò)增曲線；
陰性：Ct≥40或無擴(kuò)增；
可疑（36<Ct<40）：需復(fù)測確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
防污染：分區(qū)分操作（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增），使用帶濾芯槍頭。
質(zhì)控要求：
陰性對照：Ct≥40；
陽性對照：Ct≤35且擴(kuò)增曲線正常。
局限性：
樣本質(zhì)量、提取效率、運(yùn)輸條件可能影響結(jié)果；
基因變異可能導(dǎo)致假陰性。
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關(guān)鍵字： 地龍;探針法;PCR試劑盒;PCR鑒定試劑盒;
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