檢測原理
基于實(shí)時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，通過探針法特異性檢測大青葉核酸：
探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
信號釋放：PCR擴(kuò)增時，Taq酶切割探針，分離報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)，釋放熒光信號。
定量分析：通過監(jiān)測熒光強(qiáng)度增長（Ct值）實(shí)現(xiàn)靶序列的定性與定量檢測。
產(chǎn)品名稱 | 大青葉探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Folium Isatidis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5152 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化引物與探針，檢測限低至10<sup>1</sup>拷貝/μL。
高特異性：針對大青葉保守序列設(shè)計(jì)，避免交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液、酶、引物及探針，僅需提供樣品RNA模板。
雙模式檢測：支持定性與定量分析（線性范圍：10<sup>1</sup>–10<sup>7</sup>拷貝/μL）。
內(nèi)置對照：含無傳染性陽性對照（1×10<sup>8</sup>拷貝/μL）及陰性對照。
試劑盒組分
| 成分 | 規(guī)格 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| 大青葉引物混合液 | 100μL |
| 大青葉探針 | 50μL |
| 陽性對照（1×10<sup>8</sup>拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
標(biāo)記6管，依次稀釋陽性對照（10倍梯度，10<sup>7</sup>–10<sup>2</sup>拷貝/μL）。
每管加入45μL稀釋液及5μL上一濃度對照，渦旋混勻。
RNA提取
建議設(shè)置N+2樣本（含陽性/陰性對照）。
使用兼容RNA提取試劑（如柱式法或免提取釋放劑）。
qRT-PCR反應(yīng)
體系配置（20μL/反應(yīng)）：
緩沖液10μL + 酶混合液2μL + 探針1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。
程序設(shè)置：
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 40循環(huán) | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測：
陽性：Ct ≤ 35或 ≤ 36，且有擴(kuò)增曲線。
陰性：Ct ≥ 40。
灰區(qū)（35–40）：需復(fù)測確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需獨(dú)立區(qū)域，避免污染。
質(zhì)量控制：每次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽性對照。
防護(hù)措施：使用一次性耗材，實(shí)驗(yàn)后消毒臺面（75%乙醇或10%次氯酸）。
運(yùn)輸要求：低溫運(yùn)輸（泡沫箱加冰），避免反復(fù)凍融。
聲明
本產(chǎn)品僅限科研使用，不得用于臨床診斷或其他非科研用途。
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關(guān)鍵字： 大青葉;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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