產品用途
科研用途，適用于垂盆草RNA的定性及定量檢測，嚴禁用于臨床。
產品名稱 | 垂盆草探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Herba Sedi Sarmentosi Probe-based PCR Identification Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR5158 |
檢測原理
基于實時熒光定量PCR（qPCR）技術，采用特異性探針法：
探針設計：5'端標記熒光報告基團（如FAM），3'端標記淬滅基團，通過Taq酶5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號。
信號檢測：擴增過程中熒光強度與產物量成正比，通過Ct值定量起始模板濃度。
高特異性：引物及探針針對垂盆草保守序列設計，避免交叉反應。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/含量 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL（1×濃度） |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含逆轉錄酶）|
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| 垂盆草引物混合液 | 100μL |
| 垂盆草探針 | 50μL |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
實驗步驟
1. 標準曲線制備（10倍梯度稀釋）
標記離心管（7-2號），依次稀釋陽性對照至102~10?拷貝/μL，冰上保存。
2. RNA提取
建議設置陰性對照（NC，水）和陽性對照（PC，稀釋陽性模板）。
兼容柱式或磁珠法RNA提取試劑盒。
3. qRT-PCR反應體系（20μL）
| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對照（μL） | 標準曲線管（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探針 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| RNA模板 | 5 | - | - |
| 超純水 | - | 5 | - |
| 標準曲線稀釋液 | - | - | 5（對應梯度） |
4. 反應程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉錄 | 50℃ | 30 min |
| 預變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴增（40循環(huán)） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣本濃度。
定性判定：
陽性：Ct≤35，擴增曲線明顯；
陰性：Ct≥40；
可疑（35<Ct<40）：需復測確認。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行，避免污染。
質量控制：每次實驗需包含陰/陽性對照。
探針避光：避免反復凍融，短暫離心后使用。
廢棄物處理：實驗后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒臺面及儀器。
聲明：本產品僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
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關鍵字： 垂盆草;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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