鱈魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 鱈魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Cod-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5292 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法熒光定量PCR技術(shù)，專門用于檢測鱈魚源性成分。產(chǎn)品基于TaqMan探針原理設(shè)計(jì)，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程中的熒光信號變化，實(shí)現(xiàn)對鱈魚源性成分的高靈敏度、高特異性檢測。
檢測原理
本試劑盒采用雙標(biāo)記探針技術(shù)（TaqMan探針）：
探針5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)
當(dāng)探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)熒光被淬滅基團(tuán)抑制
PCR擴(kuò)增過程中，Taq酶5'-3'外切酶活性切割探針，使報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光信號
通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號變化，實(shí)現(xiàn)對起始模板的定量分析
產(chǎn)品組成
探針法qRT-PCR緩沖液（500μL）
探針法qRT-PCR酶混合液（100μL）
熒光PCR專用模板稀釋液（1mL）
鱈魚源性成分探針法qRT-PCR引物混合液（100μL）
鱈魚源性成分qRT-PCR探針（50μL）
鱈魚源性成分探針法qRT-PCR陽性對照（1×10?拷貝/μL，50μL）
產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用：用戶只需提供樣品RNA模板
高靈敏度：引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，檢測限低
高特異性：針對鱈魚源性成分高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，無交叉反應(yīng)
內(nèi)控對照：提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性結(jié)果
穩(wěn)定可靠：-20℃保存12個(gè)月，性能穩(wěn)定
適用范圍
本產(chǎn)品適用于：
食品中鱈魚源性成分檢測
水產(chǎn)品溯源分析
物種鑒定研究
注意：本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
標(biāo)記6個(gè)離心管（7-2號）
每管加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液
7號管加入5μL陽性對照（1×10?拷貝/μL），震蕩混勻，得1×10?拷貝/μL稀釋液
依次進(jìn)行10倍系列稀釋至2號管（1×102拷貝/μL）
所有稀釋液置于冰上待用
樣品RNA制備
設(shè)置N+2個(gè)提取（N樣品+1陽性對照+1陰性對照）
使用合適方法提取樣品RNA
RNA應(yīng)保存于液氮、干冰或Trizol液中
PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管(N+2) | 陰性對照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管(2-7) |
| qRT-PCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| qRT-PCR探針 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 樣品RNA | 5μL | - | - |
| 超純水 | - | 5μL | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | 5μL |
PCR反應(yīng)程序
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘
預(yù)變性：94℃ 10分鐘
PCR循環(huán)（40次）：
94℃ 15秒
60℃ 1分鐘（采集FAM通道熒光信號）
結(jié)果分析
定量分析
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
根據(jù)樣品Ct值計(jì)算樣品濃度
定性分析
陰性對照Ct值≥40
陽性對照Ct值≤35
樣品Ct值≤35判為陽性
注意事項(xiàng)
操作應(yīng)在獨(dú)立潔凈區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染
稀釋陽性對照時(shí)應(yīng)更換槍頭
不同批號試劑組分不可混用
實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)按照生物安全規(guī)范處理
本產(chǎn)品不提供活體陽性對照，僅含無傳染性DNA片段
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