鴨坦布蘇病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 鴨坦布蘇病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Duck Tembusu Virus Probe-based Real-time RT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5308 |
預(yù)期用途
本產(chǎn)品專用于檢測(cè)鴨坦布蘇病毒核酸，適用于科研用途，可進(jìn)行定性和定量分析。
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用設(shè)計(jì)，用戶只需提供RNA模板
優(yōu)化的引物和探針確保高靈敏度和特異性
包含陽(yáng)性和陰性對(duì)照，便于結(jié)果判讀
線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級(jí)，適合定量分析
與多種熒光定量PCR儀兼容
檢驗(yàn)原理
本試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)，針對(duì)鴨坦布蘇病毒基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針。在反應(yīng)體系中存在病毒RNA模板時(shí)，PCR擴(kuò)增過程中探針被切割釋放熒光信號(hào)，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度變化實(shí)現(xiàn)核酸的定性和定量檢測(cè)。
試劑組成
鴨坦布蘇病毒擴(kuò)增液：25μL×1管
鴨坦布蘇病毒反應(yīng)液：975μL×1管
陽(yáng)性對(duì)照：50μL×1管（1×10?拷貝/μL）
陰性對(duì)照：50μL×1管
說明書：1份
注意：不同批號(hào)組分不可混用，試劑盒內(nèi)各組分足夠完成標(biāo)示次數(shù)的檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件及有效期
-20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（建議凍融次數(shù)不超過7次），有效期12個(gè)月。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
Roche LightCycler系列
Bio-Rad CFX系列
其他具有FAM檢測(cè)通道的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
自備材料
無RNase的1.5mL離心管
0.2mL PCR反應(yīng)管
濾芯吸頭（10μL, 200μL, 1000μL）
離心機(jī)
振蕩混合器
各種規(guī)格移液器
RNA提取試劑盒（推薦柱式病毒RNA提取試劑盒）
樣本要求
樣本類型
組織樣本：腦、脾臟、肝臟等
血清/血漿
泄殖腔拭子
病毒培養(yǎng)物
樣本處理
新鮮組織樣本應(yīng)盡快處理，或保存于-20℃（短期）/-70℃（長(zhǎng)期）
血清/血漿可直接用于RNA提取
拭子樣本需用適量PBS或生理鹽水洗脫
樣本保存與運(yùn)輸
短期保存：-20℃
長(zhǎng)期保存：-70℃（不超過6個(gè)月）
運(yùn)輸條件：2-8℃冰袋運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融
使用方法
RNA提取
使用商品化病毒RNA提取試劑盒按說明書操作
提取的RNA應(yīng)立即使用或保存于-70℃
試劑準(zhǔn)備
從-20℃取出試劑盒，平衡至室溫（20-25℃）
振蕩混勻后低速離心10秒
按以下比例配制反應(yīng)混合液（以N次檢測(cè)為例）：
鴨坦布蘇病毒反應(yīng)液：19.5μL × (N+2)
鴨坦布蘇病毒擴(kuò)增液：0.5μL × (N+2)
充分混勻后分裝至PCR管，每管20μL
加樣
分別加入5μL待測(cè)樣本RNA、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照
蓋緊管蓋，短暫離心
PCR擴(kuò)增
推薦反應(yīng)程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘
預(yù)變性：95℃ 10分鐘
擴(kuò)增循環(huán)（45個(gè)循環(huán)）：
95℃ 15秒
60℃ 1分鐘（采集熒光信號(hào)）
結(jié)果分析
定量分析
以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
根據(jù)樣品Ct值計(jì)算病毒RNA濃度
定性分析
陽(yáng)性：Ct值≤36且有典型擴(kuò)增曲線
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線
可疑（36<Ct<40）：需重復(fù)檢測(cè)
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增檢測(cè)應(yīng)在不同區(qū)域進(jìn)行
使用無RNase耗材，避免RNA降解
反應(yīng)液避光保存，避免反復(fù)凍融
實(shí)驗(yàn)廢棄物需經(jīng)消毒處理（10%次氯酸或75%乙醇）
本產(chǎn)品僅用于科研，不適用于臨床診斷
質(zhì)量控制
陰性對(duì)照：Ct值≥40或無擴(kuò)增
陽(yáng)性對(duì)照：Ct值≤36且有典型擴(kuò)增曲線
無效實(shí)驗(yàn)：陽(yáng)性對(duì)照無擴(kuò)增或陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增
技術(shù)參數(shù)
檢測(cè)限：≤100拷貝/反應(yīng)
線性范圍：101-10?拷貝/μL
特異性：不與禽類其他常見病毒發(fā)生交叉反應(yīng)
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關(guān)鍵字： 鴨坦布蘇病毒;探針法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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