檢測(cè)原理
基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，采用探針法原理：
探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，探針結(jié)合靶序列后被Taq酶切割，釋放熒光信號(hào)。
定量分析：通過監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)增長(zhǎng)（Ct值）實(shí)現(xiàn)靶序列的定性和定量檢測(cè)，線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級(jí)（10<sup>1</sup>~10<sup>6</sup>拷貝/μL）。
產(chǎn)品名稱 | 草豆蔻探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Semen Alpiniae Katsumadai Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR5178 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度與特異性：引物及探針針對(duì)草豆蔻高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，避免交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液、酶混合液及引物探針，僅需提供樣品RNA模板。
雙功能檢測(cè)：支持定性和定量分析，配套陽性對(duì)照（無傳染性DNA片段）。
兼容性：適配多數(shù)病毒RNA提取試劑盒。
試劑盒組分
| 成分 | 規(guī)格 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| 酶混合液 | 100μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL |
| 引物混合液 | 100μL |
| 探針 | 50μL |
| 陽性對(duì)照（1×10<sup>8</sup>拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10倍梯度稀釋）
標(biāo)記離心管（6~1號(hào)），依次稀釋陽性對(duì)照至10<sup>6</sup>~10<sup>1</sup>拷貝/μL，冰上保存。
2. 樣品RNA制備
設(shè)置陰性對(duì)照（NC，超純水）和陽性對(duì)照（PC，陽性對(duì)照稀釋液）。
推薦使用柱式RNA提取試劑盒或兼容方法。
3. qRT-PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對(duì)照（μL） | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探針 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 樣品RNA/DNA | 5 | - | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋液 | - | - | 5 |
| 超純水 | - | 5 | - |
4. 反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| PCR循環(huán)（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集熒光） |
結(jié)果判讀
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣品濃度。
定性分析：
陽性：Ct ≤ 36，擴(kuò)增曲線呈S型。
陰性：Ct ≥ 40或無Ct值。
灰區(qū)（36<Ct<40）：需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免污染。
質(zhì)量控制：每次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽性對(duì)照。
安全提示：本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 草豆蔻;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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