產(chǎn)品原理
本試劑盒基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，采用探針法檢測(cè)蒼術(shù)特異性核酸序列。探針5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，通過(guò)Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)靶序列的定量與定性分析。
產(chǎn)品名稱 | 蒼術(shù)探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Rhizoma Atractylodis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR5179 |
產(chǎn)品組成
| 成分 | 規(guī)格 | 功能說(shuō)明 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶等 |
| 熒光PCR專用稀釋液 | 1 mL | 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品稀釋 |
| 引物混合液 | 100μL | 蒼術(shù)特異性引物 |
| 熒光探針 | 50μL | 靶序列特異性探針 |
| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL） | 50μL | 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立與質(zhì)量控制 |
| 說(shuō)明書 | 1份 | 操作指南與注意事項(xiàng) |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
取6支離心管，標(biāo)記為2-7號(hào)，每管加入45μL稀釋液。
7號(hào)管加入5μL陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL），震蕩混勻得1×10?拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品，依次梯度稀釋至1×102拷貝/μL。
2. 樣品RNA提取
使用兼容的RNA提取試劑盒制備待測(cè)樣本RNA，建議設(shè)置陰性對(duì)照（NC）和陽(yáng)性對(duì)照（PC）。
3. qPCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 體積（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板/標(biāo)準(zhǔn)品/水 | 5 |
4. 反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴(kuò)增（40循環(huán)）| 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集熒光） |
結(jié)果判讀
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣品濃度。
定性分析：
陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線。
陽(yáng)性：Ct≤35且曲線呈典型S型。
可疑（35<Ct<40）：需重復(fù)檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
操作需在獨(dú)立潔凈區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
試劑解凍后需充分混勻，避免反復(fù)凍融。
僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 蒼術(shù);探針法;PCR鑒定試劑盒;
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