酵母菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 酵母菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Yeast Genus Universal Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5313 |
產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品是基于TaqMan探針法熒光定量PCR技術(shù)開發(fā)的酵母菌屬通用檢測試劑盒，適用于酵母菌屬的快速、高靈敏度檢測。產(chǎn)品采用優(yōu)化的引物探針組合，針對酵母菌屬DNA高度保守區(qū)域設(shè)計，具有優(yōu)異的特異性和靈敏度。
產(chǎn)品特點
即開即用型試劑盒，用戶只需提供待測DNA模板
分析靈敏度高達100拷貝/反應(yīng)
特異性強，不與其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)
提供陽性對照（1×10?拷貝/μL），便于實驗質(zhì)量控制
線性范圍寬，覆蓋5個數(shù)量級，適用于定量分析
采用五孔盒包裝，組分明確，使用方便
試劑盒組成
| 組分 | 規(guī)格 | 包裝 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5mL | 0.5mL本色蓋管 |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1mL | 1.5mL綠蓋管 |
| 超純水 | 1mL | 1.5mL藍蓋管 |
| 引物-探針干粉混合物 | 50次 | 0.5mL棕色管 |
| 陽性對照(1×10?拷貝/μL) | 50μL | 0.5mL黃蓋管 |
| 使用說明書 | 1份 | - |
實驗前準備
自備試劑：樣品DNA提取試劑、無菌PCR管、帶濾芯槍頭
儀器設(shè)備：熒光定量PCR儀、微量移液器、離心機、冰盒
實驗分區(qū)：建議在樣品制備區(qū)、試劑配制區(qū)和擴增區(qū)三個獨立區(qū)域操作
使用方法
標準曲線制備（以6個10倍稀釋度為例）
標記6個離心管為1-6號
每管加入45μL模板稀釋液
在6號管中加入5μL陽性對照，震蕩混勻，得到1×10?拷貝/μL標準品
依次進行10倍系列稀釋至1號管（1×101拷貝/μL）
所有稀釋標準品置于冰上備用
樣品DNA制備
建議設(shè)置N+2個提?。∟樣品+陽性對照+陰性對照）
使用合適的DNA提取方法純化樣品DNA
定量測定DNA濃度并調(diào)整至合適濃度
PCR反應(yīng)體系配制（20μL體系）
| 組分 | 樣品管 | 陰性對照 | 標準曲線管 |
| 2×Probe MasterMix | 10μL | 10μL | 10μL |
| 引物-探針混合液 | 3μL | 3μL | 3μL |
| 樣品DNA | 7μL | - | - |
| 超純水 | - | 7μL | - |
| 標準品 | - | - | 7μL |
PCR擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10s | 45 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 40s | 45 |
| (采集FAM通道熒光信號) | | | |
數(shù)據(jù)分析
定量分析
以標準品拷貝數(shù)對數(shù)值為橫坐標，Ct值為縱坐標繪制標準曲線
根據(jù)樣品Ct值計算待測樣品中目標DNA的拷貝數(shù)
定性分析
陰性對照：無Ct值或Ct≥40
陽性對照：有明顯擴增曲線，Ct<40
待測樣品：Ct<40判為陽性，無Ct或Ct≥40判為陰性
注意事項
實驗前請仔細閱讀說明書，嚴格按照操作步驟進行
引物-探針干粉使用前需短暫離心，加入165μL超純水重懸
不同批號試劑組分不可混用
避免反復(fù)凍融，未用完試劑需-20℃保存
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷
建議佩戴手套操作，避免核酸污染
質(zhì)量控制
陽性對照應(yīng)有典型擴增曲線且Ct值<40
陰性對照應(yīng)無擴增信號或Ct值≥40
標準曲線相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)≥0.98
如質(zhì)控不合格，建議重新實驗或聯(lián)系技術(shù)支持
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關(guān)鍵字： 酵母菌屬通用;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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